Oznaka poročila: ARRS-RPROJ-ZP-2010-1/101 ZAKLJUČNO POROČILO O REZULTATIH RAZISKOVALNEGA PROJEKTA A. PODATKI O RAZISKOVALNEM PROJEKTU 1. Osnovni podatki o raziskovalnem projektu Šifra projekta Z4-1054 Naslov projekta Sistem za heterologno produkcijo poliketidnih antibiotikov na osnovi visoko donosnih industrijskih streptomicetnih sevov Vodja projekta 21392 Štefan Fujs Tip projekta Zt Podoktorski projekt - temeljni Obseg raziskovalnih ur 3.400 Cenovni razred B Trajanje projekta 02.2008 - 01.2010 Nosilna raziskovalna organizacija 2592 ACIES BIO, biotehnološke raziskave in razvoj, d.o.o. Raziskovalne organizacije - soizvajalke Družbeno- ekonomski cilj 13. Splošni napredek znanja - RiR financiran iz drugih virov (ne iz splošnih univerzitetnih fondov - SUF) 2. Sofinancerji1 1. Naziv Naslov 2. Naziv Naslov 3. Naziv Naslov B. REZULTATI IN DOSEŽKI RAZISKOVALNEGA PROJEKTA 3. Poročilo o realizaciji programa raziskovalnega projekta2 Razvoj in optimizacija heterolognega ekspresijskega sistema za izražanje metabolitov heterolognega izvora, pri kateri smo kot gostitelje uporabili industrijske visokodonosne seve, kot so Streptomyces rimosus (producent oksitetraciklina), Streptomyces albus (producent salinomicina) in Streptomyces cinnamonensis (producent monenzina) je bil cilj raziskovalnega projekta »Sistem za heterologno produkcijo poliketidnih antibiotikov na osnovi visoko-donosnih industrijskih streptomicetnih sevov«. Seva Saccharopolyspora erythraea (producent eritromicina) in Streptomyces coelicolor smo uporabili kot modlena seva za optimizacijo analitskih procesov ter za primerjavo donosov med sevi »divjega tipa« in visoko-donosnimi sevi. Tekom izvedbe tega raziskovalnega projekta smo uspešno razvili vsa potrebna orodja in ovrednotili primernost visoko-donosnih industrijskih sevov, ki bodo osnova za platformo za heterologno ekspresijo. Izvedba programa raziskovalnega projekta je potekala po predvidenih delovnih nalogah (WP), kot so bili zastavljeni na začetku projekta. V sklopu WP1 je delo zajemalo predvsem pripravo na projekt ter izvedbo vseh potrebnih praktičnih del, ki so bila potrebna za zagon projekta. V sklopu WP2 je bila predvidena optimizacija in razvoj mikrobioloških postopkov in kultivacijskih pogojev. Optimizirali smo vsa potrebna gojišča za vzdrževanje, gojenje, transformacijo in produkcijo različnih industrijskih visokodonosnih sevov npr. S. rimosus, S. cinamonnensis in S. albus. Optimizirali smo gojišča potrebna za produkcijo oksitetraciklina, monenzina in salinomicina v laboratorijskem merilu in dosegli ciljne donose posameznega antibiotika. V sklopu WP3 smo razvili analitske metode za kvantifikacijo posameznih antibiotikov. Za določanje salinomicina in monenzina smo uporabili spektrofotometrično metodo, za določanje oksitetraciklina HPLC pa metodo. Prav tako smo optimizirali metode za vrednotene izražanja ciljnih genov s pomočjo poročevalskih sistemov in razvili oziroma uvedli porečevalske sisteme na osnovi kalkon-sintaze in katehol-dioksigenaze, za katere smo uporabili spektrofotometrične metode. Za določanje produkcije modelnega poliketida triketidnega laktona (TKL) smo razvili LC-MS metodo. V WP4 smo razvili in optimizirali metodo transformacije sevov z uporabo konjugacijskega postopka iz E. coli v S. albus, S. cinamonnensis in S. coelicolor. Transformacijo sevov S. rimosus pa smo izvajali s postopkom elektroporacije. Preverjali smo tudi različne selekcijske markerje, za najbolj uporabne pa so se izkazali gen za odpornost na apramicin pri S. albus, S. coelicolor in S. cinamonnensis ter odpornost na tiostrepton pri S. rimosus. V sklopu delovnega paketa WP5 smo pripravili predvidene vektorje s poročevalskim sistemom kalkon-sintazo na osnovi integrativnega vektorja pSet152 ter različnimi promotorji kot so PActI, PErmE in PErmE*. Pripravljene vektorje smo uspešno transformirali v ciljne seve. Pridobili smo večje število transformant, ki smo jih nato testirali. V sklopu WP6 in WP7 smo preverili učinkovitost izražanja poročevalskega sistema na osnovi gena za kalkon- sintazo v različnih sevih. Testirali smo tudi učinkovitost različnih promotorjev v različnih gojiščih. Uporabili smo standardno laboratorijsko gojišče TSB (popolnoma topno gojišče) in industrijsko gojišče, ki vsebuje veliko netopnih hranil. Ugotovili smo, da je moč izražanja reporterskega sistema kalkon-sintaze odvisna tako od kombinacije seva in promotorja kot tudi od sestave samega gojišča. Razlike v moči izražanja poročevalskega gena so bile tudi do večkratne,ne glede na izbran sev, pa se je v vseh poskusih kot najmočnejši promotor izkazal PErmE*. Omenjene rezultate predstavljamo tudi v publikaciji, ki je trenutno v postopku objavljanja. Na podlagi pridobljenih rezultatov smo se odločili, da bomo v nadaljnjih eksperimentih za izražanje genov uporabljali močni promotor PErmE*. Pri eksperimentih za preverjanje učinkovitosti reporterskega sistema katehol-oksigenaze pod kontrolo promotorja PermE* v vseh treh sevih smo ugotovili, da je bilo izražanje najbolj učinkovito v sevu S. cinnamonensis, ki je imel 3-krat boljše izražanje katehol-oksigenaze v TSB gojišču v primerjavi s kontrolnim sevovm S. coelicolor. Podobno je sev S. rimosus omogočal 2,5-krat in sev S. albus 1,8-krat boljše izražanje katehol-oksigenaze. V sklopu WP8 smo pripravili vektorje za heterologno izražanje DEBS1-TE modelnega sistema, ki kodira biosintezo triketid laktona, in sicer na osnovi vektorja pSet152 ter pod kontrolo ErmE* promotorja. DEBS1-TE je »hibridni gen«, ki kodira prve tri module in tioesterazno domeno poliketid sintaze za biosintezo makrolidnega antibiotika eritromicina, zato predstavlja odličen model za ocenjevanje uporabnosti preučevanih sevov za proizvodnjo komercialno zanimivih spojin. V sklopu WP 9 smo vektor z DEBS1-TE uspešno transformirali v seva S. albus in S. cinnamonensis, za kontrolni sev pa smo izbrali sev Saccharopolyspora erythraea, ki je naravni proizvajalec eritromicina. V nadaljevanju projekta smo ovrednotili izražanje heterolognega DEBSI-TE modelnega sistema v različnih sevih in ugotovili, da je bilo izražanje v industrijskih sevu Streptomyces cinamonnensis bistveno povečan donos triketidnega laktona v primerjavi s kontrolnim sevom S. erythraea. V zadnjem delovnem sklopu WP 10 smo optimizirali različna gojišča za ekspresijo triketidnega laktona v laboratorijskem merilu. Z optimizacijo smo uspeli še dodatno dvigniti donos TKL (50% dvig donosa) in tako pridobiti gojišče, ki omogoča pripravo večjih količin modelnih spojin. V podoktorskem projektu »Sistem za heterologno produkcijo poliketidnih antibiotikov na osnovi visoko donosnih industrijskih streptomicetnih sevov« smo uspešno razvili vso potrebno metodologijo, postavili platformo za heterologno ekspresijo v izbranih visoko donosnih sevih in preverili učinkovitost izražanja enostavnih modelnih spojin. Razvita platforma predstavlja ključno izhodišče za nadaljnji razvoj novih tehnologij za heterologno produkcijo različnih poliketidnih spojin. V prihodnosti lahko pričakujemo, da bomo v povezavi s sodobnimi tehnologijami rekombinantne DNA, ki bodo omogočale prenos celotnih genskih skupin za biosintezo kompleksnih biološko aktivnih učinkovin v visokodonosne industrijske seve, dobili izredno uporabno in industrijsko uporabno tehnologijo za proizvodnjo novih medicinsko pomembnih naravnih produktov. 4. Ocena stopnje realizacije zastavljenih raziskovalnih ciljev3 Namen raziskovalnega podoktorskega projekta »Sistem za heterologno produkcijo poliketidnih antibiotikov na osnovi visoko-donosnih industrijskih streptomicetnih sevov« je bil postavitev osnove za platformo, ki bo uporabna za heterologno ekspresijo poliketidnih molekul na osnovi industrijskih visokodonosnih sevov. Tekom izvedbe projekta smo uspešno realizirali vse zastavljene cilje. Razvili smo vsa potrebna gojišča in genska orodja ter optimizirali postopke transformacije visokodonosnih sevov. Prav tako smo optimizirali vse analitske metode potrebne za ovrednotenje različnih modelnih spojin. Uspešno smo preverili učinkovitost platforme pri izbranih visoko-donosnih industrijskih sevih in dokazali, da je učinkovitost izražanje različnih reporterskih spojih pri visoko donosnih seviv nekajkrat večja kot pri sevih »divjega tipa«. Tako smo demonstrirali, da razvita platforma predstavlja dobro osnovo za heterologno izražanje poliketivnih molekul, ki bo z nadaljnjim razvojem in optimizacijo omogočila učinkovito proizvodnjo različnih medicinsko pomembnih poliketidnih učinkovin. Izvedba projekta je potekala tudi v sodelovanju s skupino doc. dr. Hrvoja Petkovića z Biotehniške fakultete, Univerze v Ljubljani ter z laboratorijem prof. dr. I.S. Hunterja (Univerza Strathclyde, Škotska). Pri raziskovalnemu delu v podjetju Acies Bio je na projektu sodelolovala tudi raziskovalka, doktorska študentka Vasilka Magdevska. 5. Utemeljitev morebitnih sprememb programa raziskovalnega projekta4 Projekt je potekal v skladu z načrtom in ni bilo bistvenih sprememb programa raziskovalnega projekta. 6. Najpomembnejši znanstveni rezultati projektne skupine5 Znanstveni rezultat 1. Naslov SLO Regulatorni elementi v genski skupinah tetraciklinskih antibiotikov ANG Regulatory elements in tetracycline-encoding gene clusters Izražanje poliketidnih genskih skupin pogosto regulirajo različne družine Opis SLO regulatornih proteinov. V članku smo izvedli primerjalno bioinformatsko analizo regulatornih genov, ki se nahajajo v oksitetraciklinski genski skupini v Streptomyces rimosus in klortetraciklinski genski skupini v S. aureofaciens. Identificirali smo nov regulatorni gen otcG iz družine LAL(luxR), ki ni prisoten v genski skupini za klortetraciklin. Z eksperimenti prekinitve in povečanim izražanjem otcG gena smo pokazali, da ima pozitivno vlogo pri biosintezi oksitetraciklina. ANG The expression of bacterial polyketide synthase gene clusters is often controlled by a number of different families of regulatory proteins. In this article, we have undertaken a comparative bioinformatic analysis of the regulatory genes present in the oxytetracycline and chlortetracycline gene clusters of Streptomyces rimosus and S. aureofaciens. We have identified a new LAL(luxR)-family regulatory gene, otcG, in the otc gene cluster, that is not present in the ctc gene cluster. By gene disruption and over-expression experiments we have demonstrated a positive role of otcG in OTC biosynthesis. Objavljeno v LEŠNIK, Urška, GORMAND, Amelie, MAGDEVSKA, Vasilka, FUJS, Štefan, RASPOR, Peter, HUNTER, Iain S., PETKOVIĆ, Hrvoje. Regulatory elements in tetracycline-encoding gene clusters : the otcG gene positively regulates the production of oxytetracycline in Streptomyces rimosus. Food technol. biotechnol., 2009, vol. 47, no. 3, str. 323-330. [COBISS.SI-ID 3608696] Tipologija 1.01 Izvirni znanstveni članek COBISS.SI-ID 3608696 2. Naslov SLO Regulacija produkcije tetraciklinskih antibiotikov ANG Regulation of tetracycline antibiotics production Opis SLO Tetraciklinski antibiotiki so industrijsko in medicinsko pomembni antibiotiki, s širokim spektrom delovanja. Preučevanje oz. poznavanje regulacije produkcije teh antibiotikov je zelo pomembno pri industrijski proizvodnji antibiotikov. V objavlenjem prispevku so bili prestavljeni predvsem rezultati regulatornega elementa, ki pozitivno vplivajo na produkcijo oksitetraciklina. ANG Tetracycline antibiotics are industrially and clinically important antibiotics with broad spectrum of activity. Understanding of the regulation of tetracycline antibiotics production is very important for industrial production of these antibiotics. In this publication, results regarding a regulatory element with positive influence on the production of oxytetracycline were presented. Objavljeno v SLADIČ, G., LEŠNIK, U., MAGDEVSKA, V., HORVAT, J., RASPOR, P., FUJS, Š., HUNTER, I. S., PETKOVIĆ, H. Regulatorni elementi v skupinah genov za biosintezo tetraciklinskih antibiotikov = Regulatory elements in gene clusters of tetracycline antibiotics. V: RASPOR, P. (ur.), PETKOVIĆ, H. (ur.). Posvetovanje Pomen biotehnologije in mikrobiologije za prihodnost, 29. in 30. januar 2009, Ljubljana. Protimikrobne snovi. Ljubljana: Biotehniška fakulteta, Oddelek za živilstvo, 2009, str. 87-95. Tipologija 1.06 Objavljeni znanstveni prispevek na konferenci (vabljeno predavanje) COBISS.SI-ID 3580280 3. Naslov SLO Identifikacija genov za biosintezo alilne skupine v FK506 ANG Identification of genes for biosynthesis of allyl group in FK506 Opis SLO V tem članku smo identifikacirali prej nepoznano regije genske skupine FK506 iz bakterije S. tsukubaensis NRRL 18488, ki vsebuje gene za zagotavljanje nenavadnih gradnikov za biosintezo FK506. Med drugim smo opredelili skupine genov, ki kodirajo biosintezo podaljševalne enote, ki določa alilno skupino na C21 spojine FK506, ki je sekundarni metabolit z močnimi imunosupresivno aktivnostjo in je trenutno registriran za uporabo kot imunsupresant pri presaditvi organov. Zanimivo je, da smo opredelili majhen neodvisen sistem diketid-sintaze, ki je vpletena biosintezo alilne skupine. ANG In this article we report the identification of a previously unidentified region of the FK506 gene cluster from S. tsukubaensis NRRL 18488 containing genes encoding provision of unusual building blocks for FK506 biosynthesis. Among others, we identified a group of genes encoding biosynthesis of the extender unit which provides the allyl group at C21 of FK506, a secondary metabolite with a potent immunosuppressant, currently registered for use after organ transplantation. Interestingly, we have identified a small independent diketide synthase system involved in the biosynthesis of allylgroup. Objavljeno v GORANOVIČ, Dušan, KOSEC, Gregor, MRAK, Peter, FUJS, Štefan, HORVAT, Jaka, KUŠČER, Enej, KOPITAR, Gregor, PETKOVIĆ, Hrvoje. Origin of the Allyl group in FK506 biosynthesis. J Biol Chem, 2010, str. [1-11, v tisku], doi: 10.1074/jbc.M109.059600. Tipologija 1.01 Izvirni znanstveni članek COBISS.SI-ID 3754104 4. Naslov SLO ANG Opis SLO ANG Objavljeno v Tipologija COBISS.SI-ID 5. Naslov SLO ANG Opis SLO ANG Objavljeno v Tipologija COBISS.SI-ID 7. Najpomembnejši družbeno-ekonomsko relevantni rezultati projektne skupine6 Družbeno-ekonomsko relevantni rezultat 1. Naslov SLO So-organizacija znastvenega srečanja "Posvetovanje Pomen biotehnologije in mikrobiologije za prihodnost" ANG Co-organization of scientific meeting "Posvetovanje Pomen biotehnologije in mikrobiologije za prihodnost" Opis SLO So-organizacija znanstvenega srečanja "Posvetovanje Pomen biotehnologije in mikrobiologije za prihodnost", kjer so bili predstavljeni rezultati programske skupine "Mikrobiologija in biotehnologija živil in okolja" in v okviru predstavitev rezultatov te programske skupine smo predstavili tudi rezultate projekta »Sistem za heterologno produkcijo poliketidnih antibiotikov na osnovi visoko-donosnih industrijskih streptomicetnih sevov«. ANG Co-organization of scientific meeting "Posvetovanje Pomen biotehnologije in mikrobiologije za prihodnost", where results of program group "Microbiology and biotechnology of food and environment" and in the scope this presentation of program group, the results of project »Heterologous polyketide production system based on super-producing industrial streptomycete strains« were presented. Šifra B.01 Organizator znanstvenega srečanja Objavljeno v RASPOR, P., BATIČ, M., ČADEZ, N., DANEVČIČ, T., EKERT, M., FUJS, Š. in sodelavci. Mikrobiologija in biotehnologija živil in okolja = Microbiology and biotechnology of food and environment. V: RASPOR, P. (ur.), PETKOVIĆ, H. (ur.). Posvetovanje Pomen biotehnologije in mikrobiologije za prihodnost, 29. in 30. januar 2009, Ljubljana. Protimikrobne snov.. Ljubljana: Biotehniška fakulteta, Oddelek za živilstvo, 2009, str. 259-272. Tipologija 1.08 Objavljeni znanstveni prispevek na konferenci COBISS.SI-ID 3581304 2. Naslov SLO Nov in patentno-neodvisen biosintezni proces za proizvodnjo generičnega produkta New and patent-independent biosynthetic process for production of generic ANG product Opis SLO V sodelovanju s Krko d.d. smo razvili nov in patentno-neodvisen biosintezni proces za proizvodnjo generičnega produkta iz skupine sekundarnih metabolitov, za katerega je bila vložena tudi PCT patentna aplikacija. Določena znanja pridobljena tekom tega raziskovalnega projekta so pripomogla k nastanku te patentne aplikacije. ANG In collaboration with pharmaceutical company Krka, we have developed a new and patent-independent fermentation process for production of generic product from group of secondary metabolites. PCT patent application was filed. Certain expertise acquired during this research project has contributed to the creation of this patent application. Šifra F.01 Pridobitev novih praktičnih znanj, informacij in veščin Objavljeno v FUJS, Štefan, KUŠČER, Enej, PETKOVIĆ, Hrvoje, SLADIČ, Gordan, GASPARIČ, Aleš. Process for production of lipstatin and microorganisms therefore : European patent application : EP 2 141 236 A1 : application no. 08012016.5. München: Europäisches Patentamt: = European Patent Office: = Office europeen des brevets, 06.01.2010. Tipologija 2.23 Patentna prijava COBISS.SI-ID 3746168 3. Naslov SLO ANG Opis SLO ANG Šifra Objavljeno v Tipologija COBISS.SI-ID 4. Naslov SLO ANG Opis SLO ANG Šifra Objavljeno v Tipologija COBISS.SI-ID 5. Naslov SLO ANG Opis SLO ANG Šifra Objavljeno v Tipologija COBISS.SI-ID 8. Drugi pomembni rezultati projetne skupine7 Članek »Robust reporter system based on chalcone synthase rppA gene from Saccharopolyspora erythraea« bo vseboval rezultate pridobljene v tem raziskovalnem projektu na poročevalskem sistemu s kalkon-sintazo (rppA gen). V publikaciji bo predstavljenje učinkovitost izražanja tega reporterja v različnih visoko-donosnih industrijskih sevih. Publikacija je trenutno v procesu objavljanja in predvidevamo, da bo sprejet v objavo v naslednjih mesecih. Določena znanja, ki smo jih pridobili tekom tega projekta na reporterskem sistemu za izražanje triketidnih laktonov (TKL), pa smo tudi uporabili pri pripravi nove patentne aplikacije. 9. Pomen raziskovalnih rezultatov projektne skupine8 9.1. Pomen za razvoj znanosti- SLO_ Cilj raziskovalnega projekta je bil postaviti sistem za heterologno izražanje medicinsko pomembnih poliketidnih metabolitov v izbranih industrijskih visoko donosnih streptomicetnih sevih. Poliketidi in njihovi polsintezni derivati naravnega izvora predstavljajo izjemno pomembno skupino biološko aktivnih učinkovin medicinskega in komercialnega pomena. Kljub njihovi veliki tržni vrednosti in medicinskemu pomenu tovrstne biološko aktivne učinkovine, farmacevtska industirja pretežno še danes proizvaja s klasičnimi biosinteznimi postopki in/ali postopki klasične (pol)sintezne kemije, ki so pogosto cenovno neugodni in/ali zelo okolju neprijazni. Številni industrijski sevi so omejeni z nizkimi donosi in zahtevnimi bioprocesi. Pogosto so napori razvojni inženirijev v farmacevtski industirji omejeni tudi zaradi slabo razvitih orodji za genske manipulacije. Novejši pristopi, kot so kombinatorni in (kemo-)biosintezni inženiring ter novejši pristopi metagenomika, povezani z učinkovito uporabo genomike, prinašajo nove medicinsko uporabne bioaktivne spojine oziroma nove biološko aktivne učinkovine (kandidate) za nova zdravila. Odkriti so bili tudi številni novi mikroorganizmi, ki proizvajajo naravne produkte z zelo obetavnimi biološkimi aktivnostmi, vendar jih je zelo težko ali celo nemogoče gojiti v industirjskem obsegu (nekultivabilni mikroorganizmi). Vse to jasno nakazuje, da obstaja velika potreba po zanesljivem in robustnem sistemu za visoko donosno izražanje obstoječih ali novih in danes še nepoznanih biosinteznih genskih skupin v heterolognih gostiteljih. S tem namenom smo uspešno razvili potrebna genska orodja in metodologijo prilagodili visoko-donosnim industrijskim gostiteljskim sevom. Postavljena platforma na osnovi industrijskih visoko-donosnih streptomicetnih gostiteljskih sevov skupaj z novimi genskimi orodji in metodami za ekspresijo PKS sistemov predstavlja potencialno industrijsko uporabno in tržno zanimivo tehnologijo za proizvodnjo novih medicinsko pomembnih naravnih produktov. ANG The objective of this research project was to construct a heterologous expression system for medicinally important polyketide metabolites using known industrial high-producing Streptomyces strains and processes. Polyketides and their semi-synthetically modified natural products represent a large group of biologically active compounds with high clinical and commercial significance. . Polyketides, despite their wide medical and commercial importance, are still primarily produced using classical biosynthetic processes and/or classical semi- synthetic chemistry approaches with high costs and environmental burden. Industrial microbial strains are constrained by low yields and complex bioprocesses. Furthermore, efforts of researchers in pharmaceutical industry are often hampered by poor susceptibility of these strains to genetic manipulation. Novel approaches such as combinatorial and biosynthetic engineering as well as novel metagenomics approaches, coupled with the effective genome mining of available genomic information, constantly bring exciting new biologically active and medicinally important compounds and drug candidates. A number of novel microorganisms producing natural products with very promising biological activities have been identified of which many are very difficult or impossible to cultivate in industrial scale ("the unculturables"). All this clearly demonstrates that there is a strong requirement for a reliable and robust system for high-level expression of existing or novel currently unknown biosynthetic clusters in heterologous hosts. Therefore, necessary genetic tools were successfully developed and methods adapted to high-yield industrial host strains. This platform based on industrial polyketide super-producing Streptomyces hosts, reinforced with novel tools and methods applicable for heterologous expression of PKS systems and represents a potentially very powerful and industrially applicable technology for production of novel polyketide natural products of medical importance. 9.2. Pomen za razvoj Slovenije10 SLO Razvoj robustne in zanesljive platforme za heterologno proizvodnjo obstoječih ali novih medicinsko pomembnih poliketidnih spojin za biotehnološko podjetje Acies Bio pomeni velik tehnološki napredek, ki bo podjetju omogočil dodatno konkurečno prednost na trgu farmacevtske biotehnologije. Razvoj platforme bo imel pozitiven vpliv tudi za slovensko farmacevtsko industrijo, saj je uporabnost platforme usmerjena prav za izboljšano heterologno produkcijo generičnih farmacevtskih produktov, ki predstavljajo pomemben delež v poslovanju slovenskih farmacevtskih podjetij. Izvedba projekta »Sistem za heterologno produkcijo poliketidnih antibiotikov na osnovi visoko-donosnih industrijskih streptomicetnih sevov« je potekala tudi v sodelovanju z Biotehniško fakulteto Univerze v Ljubljani. V sklopu tega projekta so sodelovali tudi študenti dodiplomskega in podiplomskega študije Biotehniške fakultete in je tako neposredno spodbujala raziskovalne in pedagoške aktivnosti na področju industrijske mikrobiologije in mikrobne biotehnologije ter povečala pretok in prenos znanja med univerzo in industrijo. ANG_ The development of robust and reliable platform for heterologous production of existing or novel medically important polyketides brings important technological progress for the biotech company Acies Bio, providing additional competitive advantage in the field of pharmaceutical biotechnology. In addition, the development of this platform will benefit Slovenian pharmaceutical industry in general, as the platform is intended specifically towards improved heterologous production of generic pharmaceutical products, which account for an important part of activities of Slovenian pharmaceutical companies. The project "Heterologous polyketide production system based on super-producing industrial streptomycete strains" was carried out in collaboration with the Biotechnical faculty of the University of Ljubljana. In the scope of this project, undergraduate and graduate students of the University of Ljubljana were actively involved, which directly stimulated research and teaching activities in the field of industrial microbiology and microbial biotechnology as well as allowed for knowledge transfer between academia and industry. 10. Samo za aplikativne projekte! Označite, katerega od navedenih ciljev ste si zastavili pri aplikativnem projektu, katere konkretne rezultate ste dosegli in v kakšni meri so doseženi rezultati uporabljeni Cilj F.01 Pridobitev novih praktičnih znanj, informacij in veščin Zastavljen cilj DA NE Rezultat 1 z. Uporaba rezultatov 6 F.02 Pridobitev novih znanstvenih spoznanj Zastavljen cilj oda one Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.03 Večja usposobljenost raziskovalno-razvojnega osebja Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.04 Dvig tehnološke ravni Zastavljen cilj oJ DA J NE Rezultat 1 d Uporaba rezultatov 6 F.05 Sposobnost za začetek novega tehnološkega razvoja Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.06 Razvoj novega izdelka Zastavljen cilj oda one Rezultat 1 6 Uporaba rezultatov 6 F.07 Izboljšanje obstoječega izdelka Zastavljen cilj da One Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.08 Razvoj in izdelava prototipa Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.09 Razvoj novega tehnološkega procesa oz. tehnologije Zastavljen cilj DA J NE Rezultat 1 6 Uporaba rezultatov 6 F.10 Izboljšanje obstoječega tehnološkega procesa oz. tehnologije Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.11 Razvoj nove storitve Zastavljen cilj da One Rezultat 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.12 Izboljšanje obstoječe storitve Zastavljen cilj DA NE Rezultat 1 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.13 Razvoj novih proizvodnih metod in instrumentov oz. proizvodnih procesov Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.14 Izboljšanje obstoječih proizvodnih metod in instrumentov oz. proizvodnih procesov Zastavljen cilj DA NE Rezultat 1 6 Uporaba rezultatov 6 F.15 Razvoj novega informacijskega sistema/podatkovnih baz Zastavljen cilj da One Rezultat 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.16 Izboljšanje obstoječega informacijskega sistema/podatkovnih baz Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.17 Prenos obstoječih tehnologij, znanj, metod in postopkov v prakso Zastavljen cilj da One Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.18 Posredovanje novih znanj neposrednim uporabnikom (seminarji, forumi, konference) Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.19 Znanje, ki vodi k ustanovitvi novega podjetja ("spin off") Zastavljen cilj da One Rezultat 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.20 Ustanovitev novega podjetja ("spin off") Zastavljen cilj DA NE Rezultat 1 6 Uporaba rezultatov 6 F.21 Razvoj novih zdravstvenih/diagnostičnih metod/postopkov Zastavljen cilj da One Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.22 Izboljšanje obstoječih zdravstvenih/diagnostičnih metod/postopkov Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.23 Razvoj novih sistemskih, normativnih, programskih in metodoloških rešitev Zastavljen cilj DA NE Rezultat 1 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.24 Izboljšanje obstoječih sistemskih, normativnih, programskih in metodoloških rešitev Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.25 Razvoj novih organizacijskih in upravljavskih rešitev Zastavljen cilj DA NE Rezultat 1 6 Uporaba rezultatov 6 F.26 Izboljšanje obstoječih organizacijskih in upravljavskih rešitev Zastavljen cilj Oda One Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.27 Prispevek k ohranjanju/varovanje naravne in kulturne dediščine Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.28 Priprava/organizacija razstave Zastavljen cilj O DA J NE Rezultat 1 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.29 Prispevek k razvoju nacionalne kulturne identitete Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.30 Strokovna ocena stanja Zastavljen cilj Oda One Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.31 Razvoj standardov Zastavljen cilj Oda ne Rezultat 1 6 Uporaba rezultatov 1 6 F.32 Mednarodni patent Zastavljen cilj DA NE Rezultat 1 6 Uporaba rezultatov 6 F.33 Patent v Sloveniji Zastavljen cilj Oda One Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.34 Svetovalna dejavnost Zastavljen cilj DA NE Rezultat 6 Uporaba rezultatov 6 F.35 Drugo Zastavljen cilj Oda One Rezultat Uporaba rezultatov 6 Komentar 11. Samo za aplikativne projekte! Označite potencialne vplive oziroma učinke vaših rezultatov na navedena področja Vpliv Ni vpliva Majhen vpliv Srednji vpliv Velik vpliv G.01 Razvoj visoko-šolskega izobraževanja G.01.01. Razvoj dodiplomskega izobraževanja O O o o G.01.02. Razvoj podiplomskega izobraževanja O o o o G.01.03. Drugo: o o o o G.02 Gospodarski razvoj G.02.01 Razširitev ponudbe novih izdelkov/storitev na trgu o O O O G.02.02. Širitev obstoječih trgov o o o o G.02.03. Znižanje stroškov proizvodnje o o o o G.02.04. Zmanjšanje porabe materialov in energije O O O o G.02.05. Razširitev področja dejavnosti O o o o G.02.06. Večja konkurenčna sposobnost o o o o G.02.07. Večji delež izvoza o o o o G.02.08. Povečanje dobička o o o o G.02.09. Nova delovna mesta o o o o G.02.10. Dvig izobrazbene strukture zaposlenih o O O o G.02.11. Nov investicijski zagon o o o o G.02.12. Drugo: o o o o G.03 Tehnološki razvoj G.03.01. Tehnološka razširitev/posodobitev dejavnosti o O O O G.03.02. Tehnološko prestrukturiranje dejavnosti O O O o G.03.03. Uvajanje novih tehnologij o o o o G.03.04. Drugo: o o o o G.04 Družbeni razvoj G.04.01 Dvig kvalitete življenja o o o o G.04.02. Izboljšanje vodenja in upravljanja O o o o G.04.03. Izboljšanje delovanja administracije in javne uprave O O O O G.04.04. Razvoj socialnih dejavnosti o o o o G.04.05. Razvoj civilne družbe o o o o G.04.06. Drugo: o o o o G.05. Ohranjanje in razvoj nacionalne naravne in kulturne dediščine in identitete O O O O G.06. Varovanje okolja in trajnostni razvoj O O O O G.07 Razvoj družbene infrastrukture G.07.01. Informacijsko-komunikacijska infrastruktura O O O O G.07.02. Prometna infrastruktura o o o o G.07.03. Energetska infrastruktura o o o o G.07.04. Drugo: o o o o G.08. Varovanje zdravja in razvoj zdravstvenega varstva O O O O G.09. Drugo: o o o o Komentar 12. Pomen raziskovanja za sofinancerje, navedene v 2. točki11 1. Sofinancer Vrednost sofinanciranja za celotno obdobje trajanja projekta je znašala: EUR Odstotek od utemeljenih stroškov projekta: % Najpomembnejši rezultati raziskovanja za sofinancerja Šifra 1. 2. 3. 4. 5. Komentar Ocena 2. Sofinancer Vrednost sofinanciranja za celotno obdobje trajanja projekta je znašala: EUR Odstotek od utemeljenih stroškov projekta: % Najpomembnejši rezultati raziskovanja za sofinancerja Šifra 1. 2. 3. 4. 5. Komentar Ocena 3. Sofinancer Vrednost sofinanciranja za celotno obdobje trajanja projekta je znašala: EUR Odstotek od utemeljenih stroškov projekta: % Najpomembnejši rezultati raziskovanja za sofinancerja Šifra 1. 2. 3. 4. 5. Komentar Ocena C. IZJAVE Podpisani izjavljam/o, da: • so vsi podatki, ki jih navajamo v poročilu, resnični in točni • se strinjamo z obdelavo podatkov v skladu z zakonodajo o varstvu osebnih podatkov za potrebe ocenjevanja, za objavo 6., 7. in 8. točke na spletni strani http://sicris.izum.si/ ter obdelavo teh podatkov za evidence ARRS • so vsi podatki v obrazcu v elektronski obliki identični podatkom v obrazcu v pisni obliki • so z vsebino zaključnega poročila seznanjeni in se strinjajo vsi soizvajalci projekta Podpisi: Štefan Fujs in podpis vodje raziskovalnega projekta zastopnik oz. pooblaščena oseba RO Kraj in datum: Ljubljana 16.4.2010 Oznaka poročila: ARRS-RPROJ-ZP-2010-1/101 1 Samo za aplikativne projekte. Nazaj 2 Napišite kratko vsebinsko poročilo, kjer boste predstavili raziskovalno hipotezo in opis raziskovanja. Navedite ključne ugotovitve, znanstvena spoznanja ter rezultate in učinke raziskovalnega projekta. Največ 18.000 znakov vključno s presledki (približno tri strani, velikosti pisave 11). Nazaj 3 Realizacija raziskovalne hipoteze. Največ 3.000 znakov vključno s presledki (približno pol strani, velikosti pisave 11). Nazaj 4 Samo v primeru bistvenih odstopanj in sprememb od predvidenega programa raziskovalnega projekta, kot je bil zapisan v predlogu raziskovalnega projekta. Največ 3.000 znakov vključno s presledki (približno pol strani, velikosti pisave 11). Nazaj 5 Navedite največ pet najpomembnejših znanstvenih rezultatov projektne skupine, ki so nastali v času trajanja projekta v okviru raziskovalnega projekta, ki je predmet poročanja. Za vsak rezultat navedite naslov v slovenskem in angleškem jeziku (največ 150 znakov vključno s presledki), rezultat opišite (največ 600 znakov vključno s presledki) v slovenskem in angleškem jeziku, navedite, kje je objavljen (največ 500 znakov vključno s presledki), izberite ustrezno šifro tipa objave po Tipologiji dokumentov/del za vodenje bibliografij v sistemu COBISS ter napišite ustrezno COBISS.SI-ID številko bibliografske enote. Navedeni rezultati bodo objavljeni na spletni strani http://sicris.izum.si/. PRIMER (v slovenskem jeziku): Naslov: Regulacija delovanja beta-2 integrinskih receptorjev s katepsinom X; Opis: Cisteinske proteaze imajo pomembno vlogo pri nastanku in napredovanju raka. Zadnje študije kažejo njihovo povezanost s procesi celičnega signaliziranja in imunskega odziva. V tem znanstvenem članku smo prvi dokazali... (največ 600 znakov vključno s presledki) Objavljeno v: OBERMAJER, N., PREMZL, A., ZAVAŠNIK-BERGANT, T., TURK, B., KOS, J.. Carboxypeptidase cathepsin X mediates ß2 - integrin dependent adhesion of differentiated U-937 cells. Exp. Cell Res., 2006, 312, 2515-2527, JCR IF (2005): 4.148 Tipopologija: 1.01 - Izvirni znanstveni članek COBISS.SI-ID: 1920113 Nazaj 6 Navedite največ pet najpomembnejših družbeno-ekonomsko relevantnih rezultatov projektne skupine, ki so nastali v času trajanja projekta v okviru raziskovalnega projekta, ki je predmet poročanja. Za vsak rezultat navedite naslov (največ 150 znakov vključno s presledki), rezultat opišite (največ 600 znakov vključno s presledki), izberite ustrezen rezultat, ki je v Šifrantu raziskovalnih rezultatov in učinkov (Glej: http://www.arrs.gov.si/sl/gradivo/sifranti/sif-razisk- rezult.asp), navedite, kje je rezultat objavljen (največ 500 znakov vključno s presledki), izberite ustrezno šifro tipa objave po Tipologiji dokumentov/del za vodenje bibliografij v sistemu COBISS ter napišite ustrezno COBISS.SI-ID številko bibliografske enote. Navedeni rezultati bodo objavljeni na spletni strani http://sicris.izum.si/. Nazaj 7 Navedite rezultate raziskovalnega projekta v primeru, da katerega od rezultatov ni mogoče navesti v točkah 6 in 7 (npr. ker se ga v sistemu COBISS ne vodi). Največ 2.000 znakov vključno s presledki. Nazaj 8 Pomen raziskovalnih rezultatov za razvoj znanosti in za razvoj Slovenije bo objavljen na spletni strani: http://sicris.izum.si/ za posamezen projekt, ki je predmet poročanja. Nazaj 9 Največ 4.000 znakov vključno s presledki Nazaj 10 Največ 4.000 znakov vključno s presledki Nazaj 11 Rubrike izpolnite/prepišite skladno z obrazcem "Izjava sofinancerja" (http://www.arrs.gov.si/sl/progproj/rproj/gradivo/), ki ga mora izpolniti sofinancer. Podpisan obrazec "Izjava sofinancerja" pridobi in hrani nosilna raziskovalna organizacija - izvajalka projekta. Nazaj Obrazec: ARRS-RPROJ-ZP/2010 v1.00a DF-D6-F0-14-B7-50-96-DE-5E-11-7B-F0-A7-D7-0A-BA-2E-89-6E-64