Development of quantitative RT-PCR assays for wild-type urokinase receptor (uPAR-wt) and its splice variant uPAR-del5

angleški

2004

letnik 38, številka 2

biokemija   Dojka, novotvorbe   Jajčnik, novotvorbe   Novotvorbe   onkologija   Polimerazna, verižna reakcija   rak (medicina)   RNA, prenašalna   RNA, spajanje   Tumorske celične kulture

Društvo radiologije in onkologije
(Obvezni izvod spletne publikacije)

Receptor serinske proteinaze plazminogenskega aktivatorja urokinaznega tipa, uPAR (CD 87) igra pomembno vlogo v invaziji tumorskih celic in pri metastaziranju čvrstih malignih tumorjev. uPAR je močno glikoziliran membranski protein, vsajen v glikan-lipidne membrane in sestavljen iz treh homolognih domen. Posamezna domena je kodirana z dvema eksonoma: D1 z eksonoma2 + 3, DII z eksonoma 4 + 5 in DIII z eksonoma 6 + 7. Poleg nemutiraneuPAR-wt RNA, sta bili opisani tudi dve izrezovalni različici, ki bodisi nimata eksona 5 (uPAR-de15) bodisi obeh eksonov 4 in 5 (uPAR-de14/5). Predhodno smo z metodo RT-PCR v realnem času za kvantitativno določevanje mRNAkoncentracije proučevali izražanje mRNA različic uPAR-de14/5 in uPAR mRNA,ki vsebujeta eksone 2,3 in 4 (to je nemutirana uPAR-wt in uPAR-de15). V tem prispevku smo dodatno uveljavili dva specifična, robustna in zelo občutljiva testa RTPCR, ki temeljita na tehnologiji Light-Cyler, da bi specifično določevali vsebnosti uPAR-wt in njegovo izrezovalno različico uPAR-de15. Izražanje uPAR-wt in uPAR-de15 je bilo merjeno v različnih človeških malignih celičnih linijah (ovarijskih rakavih celicah OVMZ-6 in OVMZ-10; rakavih celic dojke MDA-MB 231, MDA-MB 231 BAG, MDA-MB 435 in aMCF-7;možganskih celičnih linijah LN18) kakor tudi v zbiru 174 vzorcev tkiva raka dojke. uPAR-del5 mRNA je bila zelo pogosto izražena v razmeroma nizkih vsebnostih (značilno manj kot 1% glede na uPARwt mRNA). V tumorskem tkivu rakavih bolnikov je bila opažena statistično značilna korelacija med uPAR-de15in uPAR-wt mRNA (r=0.779; P > 0.001). Povezave med izražanjem obeh vrst mRNA in kliničnimi parametri, kakor so status bezgavk velikostjo tumorja in gradusa ni bilo. Značilno povišanje uPAR-de15 pa je bilo opaženo v mailgnihtumorjih z negativnim estrogenskim receptorjem. (Izvleček skrajšan pri2000 znakih).

16.09.2009