Izvor acetilholinesteraze v živčno-mišičnem stiku sesalca - Jevšek, Marko (Medicinski razgledi, 2002)
Molekularni mehanizmi nastajanja sinaps so ena od osrednjih tem modernih nevrobioloških znanosti. Acetilholinesteraza (AChE) je encim, ki katalizira hidrolizo acetilholina in tako prekine holinergičen prenos signala v živčno-mišičnem stiku (ŽMS). Velika večina AChE je v tej sinapsi pričvrščena na bazalno lamino oz. membrano. Ta se nahaja med presinaptično membrano, ki jedel živčnega končiča, in postsinaptično membrano, ki je del mišičnega vlakna. Ker poteka sinteza AChE tako v motoričnem nevronu kot v mišičnem vlaknu, je teoretično možno, da je izvor AChE tako v enem kot v drugem tkivu. Dosedanje raziskave močno podpirajo mišični izvor, a dopuščajo tudi možnost živčnega izvora AChE v ŽMS. V tej nalogi smo preučevali izvor sinaptične AChE v zgodnejši fazi nastajanja sesalskega ŽMS v pogojih in vitro. V preučevani zgodnji fazi razvoja ŽMS prispeva motorični nevron vsaj del AChE, ki jo najdemo v sinaptični špranji. V poskusih smo uporabili in vitro sistem, v katerem smo človeške mišične cevčice gojili v kokulturi z eksplanti, izoliranimi iz podganje hrbtenjače. V teh kokulturah se med mišičnimi cevčicami in motoričnimi nevroni, ki izrastejo iz eksplantov, razvijejo visokodiferencirani ŽMS. Z uporabo vrstno specifičnih protiteles proti človeški in podganji AChE smo z imunofluorescenčno metodo ugotavljali, ali je sinaptična AChE človeškega (mišičnega) ali podganjega (živčnega) izvora. Vrstno specifičnost protiteles smo preverili z metodo Western blot. ŽMS smo identificirali s kombiniranjem faznokontrastne mikroskopije mišičnih in živčnih vlaken in flourescenčne mikroskopije skupkov acetilholinskih receptorjev. Slednje smo opazovali, prek vezave a-bungarotoksina, označenega zrodaminom. (Izvleček prekinjen pri 2000 znakih).
Keywords: Acetilholinesteraza; Acetylcholinesterase; Celične kulture; Neuromuscular Junction; Mišica skeletna; Muscle, Skeletal; Živčnomišični stik; Innervation; Anatomy And Histology; Elektroforeza, poliakrilamid gel; Cells, Cultured; Imunohistokemija; nevrobiologija; Immunohistochemistry; Electrophoresis, Polyacrylamide Gel; sinapse; živčno mišični stik; celične kuture; molecular biology; molekularna biologija; sesalci