KRALJEVINA JUGOSLAVIJA UPRAVA ZA ZAŠTITU Klasa 30 (6) INDllSTRISKE SVOJINE Izdan 15 februaia 1933. PATENTNI SPIS BR.9689 Mc Kesson & Robins, Incorporated, Bridgeport, Connecticut, U. S. A. Postupak za proizvodnju jednog ljekovitog preparata kao sredstvo za regeneraciju haemoglobina. Prijava od 27 juna 1931. Važi od 1 maja 1932. Traženo pravo prvenstva od 30 juna 1930 (U. S. A.). Predležeči pronalazak se odnaša sveop- če na proizvodnju nekog ljekovitog prepa¬ rata za lječenje malokrvnosti (anemije) l (ili) prirodene malokrvnosti a napose na jedan takav preparat, koji služi za rege¬ neraciju haemoglcbiina u krvi. Haemoglo- bin sadrži željeza, kao jedan od njegovih sastavnih djelova. Radi toga se je težilo za tim, da se pri lječenju malokrvnosti pogla- vito obnovi haemoglobin uvadanjem želje¬ za u različitim spojevima u kruženje krvi. Predmet ovog pronalaska je dakle pro¬ izvodnja nekog preparata, koji osobito pospješuje asimilaciju željeza ili stvaranje krvi, povišuje sadržinu na haemaglobinu u krvi i time stvarno djeluje kao ljek za ma¬ lokrvnost i (ili) prirodenu malokrvnost. Stoga razloga sadrži preparat neki že¬ ljen! spoj, najzgodnije u obliku proteida, a još bolje u obliku željeznog nukleinata ik željeznog peptona a osim toga kao zgodan dodatak neki agens, koji djeluje Vjerojatno kao katalizator za asimilaciju željeza ili za stavranje haemoglobina. Taj dodatni agens je neki osobito zgodan ba¬ kreni spoj, kao bakreni proteid ili još bo¬ lje bakreni nukleinat ili bakreni kazein ili njihova mješavina. Najzgodniji oblik preparata sadrži dakle željezo i bakar, koji mu se dodaju u jed¬ ilom ili u više gore napomenutih spojeva. Svaki od u slijedečem navedenih prepa¬ rata pokazao se je uspješan za lječenje malokrvnosti i (ili) prirodene malokrv¬ nosti: * 1. Rastopina bakrenog nukleinata i že¬ ljeznog nukleinata. 2. Rastopina bakrenog nukleinata i že¬ ljeznog peptona. 3. Rastopina bakrenog kazeina i željez¬ nog peptona. Od gornjih preparata imaju prednost oni, koji sadržuju oboje, željezo i bakar, u obliku nukleinata. Nukleoproteini uopče a nuklein-kiselina napose fgraju važnu ulogu za asimilaciono 1 tijelo. Uvadanje željeza i bakra u takovim oblicima vrlo je zgodno za apscrpciju ovih elemenata u krvi i spo¬ sobno za stvaranje haemoglobina. Osim to¬ ga posjeduju željezni i bakreni spojevi uopče svojstvo stezanja i tokiseno švoj- stvo a pošto se kriju pod oblikom organ¬ skih spojeva a osobito pod oblikom pro¬ teida, svladana su ta neželjena svojstvd. Slijedeči podatci su rezultat pokuša sa malokrvnim parcovima. Za dobijanje malokrvnih parcova za po- kuse našlo se je kao probitačno, da se hra¬ ne majke za vrijeme dojenja posebnom hranom (Pharmakopo United States IX. iz¬ da nje) k torne s toplim ml jekom od puno- mlječnog praška, ali bez vegetabilnih tva- ri i mesa. U 21 danu starosti oduzmu se legla i stave na hranu sa punim kravjim mljekom. Kod na ovaj način hranjenih po- kusnih žllvotinja pokazalo se je vidljivo razvijanje malokrvnosti, što se je moglo dokazati nakon 3—4 tjedna sadržinom ha¬ emoglobina u krvi i promjenom boje na očima, ušesima, nogama i repovima. Sa- držina na haemoglobinu iznašala je kod Din. 15. tih životinja na koncu te periode oko 5 grama na 100 cm 3 krvi. U tom stanju pokuša stavile su se živo- tinje pojedince u kaveze i hranile kroz 6 dana u tjednu dnevno sa .lednim cm 3 po- kusne mješavfne, rastopljene u po prilici pet cm 3 mljeka. Kada se je taj obrok po- trošio, dobila je svaka životinja dnevno po prilici pedeset cm 3 mljeka. Istraživanje haemoglobina lizvadalo se je svakog tjedna pomoču Newcomerovog m.jerila za haemo- globin na pr. u krvi, koja se je kako je to uobičajeno, izuzimala repovima parcova. Izvaganje se je vršilo svakog tjedna za vri- jeme pokusne periode. U tablici I navedeni su poprečni rezul¬ tati ustanovljenog haemoglobina i težine za tri pokusne životinje i tri kontrole. Po¬ kusne životinje dobivale su, kako je to pri¬ kazano u tablici I, 0,25 mg bakra kao nu- kleinat (29,72% Cu) i 0,50 mg željeza, kao željezni nukleinat (8,89% Fe). Iz toga ra- zabiremo, da je porasla sadržina na ha- emoglobinu nakon davanja bakra i željeza u jednom tjednu od 6,7 grama na 100 cm 3 krvi, na 14,6 grama. Tablica I. Tablica II sadrži poprečne rezultate usta¬ novljenog haemoglobina i težine od četiri pokusna parceva, koji su dobivali 0,25 mg bakra kao bakreni nukleinat (29,72% Cu) i 0,50 mg željeza kao željezni pepton (17,5%' Fe). Tablica II. Pokusne životinje (4) U tablici III navedeni su rezultati usta¬ novljenog haemoglobina i težina od četiri pokusnih životinja, koje su dobile 0,25 mg bakra kao bakreni nukleinat (9,82% Cu) i 0,50 mg željeza kao željezni pepton (17,5% Fe). Tablica III. Pokusne životinje (4) U tablicama IV i V navedeni su popreč¬ ni rezultati ustanovljenog haemoglobina i težine od šest pokusnih životinja, koje su dobile 0,24 mg bakra kao bakreni kasein (4,87 % Cu) i 0,50 mg željeza kao željezni pepton (17,5% Fe). Tablica IV. Proizvodnja bakrenog nukleinata iz kvasa. Bakreni nukleinat proizvodio se je iz kvasa na sljedeči način: dvesta grama kva¬ sa pomješala su se sa 1000 m 3 destilova- ne vode i mješala uz dodavanje od 10 gr koncentrovane rastopine NaOH. Za vrije- me hladenja ledom neutralizovalo se je 0,8 od alkalija pomoču koncentrovanog HC1 (20 grama) i konačno ukisla rastopina uz upotrebu Lakmusove harti.je sa 30% octe- ne kiseline. Oborina se je otaložila preko noči a tekuči dio procijedio kroz složenu hartiju za filtrisanje. Zatim se je dodala koncentracija od po prSlici 4!/2>% bakrenog sulfata i rastopina temeljito promješala, dok se je cijeli bakreni sulfat rastopio. Smjesta se je stvorio modrozelenkasti svjetli pahuljasti talog, kojji se je pustio sjesti. Gornji tekuči dio odlijao se je a ta¬ log dva puta isprao dekantaciom vodom. Ostatak se je zatim filtrisao pomoču isisa- vanja u Buchnerovom filteru i temeljito is¬ prao filtrovanom vodom do potpunog o- slbodenja od sulfata. Talog se je zatim u- sitnio sa 95^%-nim alkoholom u staklenom mužaru na prašak, filtrisao pomoču isisa- vanja a zatim dva puta isprao alkoholom i podvrgao istorn postupku sa eterom. Ko- načno se je talog posušio na zraku na har- tiji za filtrisanje i dobio u obliku svjetlog modrozelenkastog amorfnog praška. Dobi- tak na bakrenom nukleinatu iznašao je 6,24 grama. Analizom se je našlo, da sadrži taj spoj 29,72% brkra i 10,3% fosfora. Uobi- čajenim načinom ispitivanja nije se našlo ništa sulfata. Proizvodnja željeznog nukleinata iz kvasa. Željezni nukleinat proizveo se je iz kva¬ sa prilično na isti način, kao bakreni spoj time, da se je umjesto bakrenog sulfata C. P. upotrebio željezni klorid. Ipak je bilo potrebno, da se je izlučio želieznti spoj u šesdeset postotnom alkoholu, što treba pri¬ pisati djelomičnoj rastcpivosti željeznog nukleinata u vodi. Ispiranje taloga sa šes¬ deset i devedesetpostotnim alkoholom slijedio je postupak sa eterom, kao kod proizvodnje bakrenog spoja. Dobio se je neki amorfan, svijetlo smedi spoj, koji je sadržao po analizi 8,89% željeza i 4,21% fosfora. Dobitak iz 100 grama kvasa izna¬ šao je 7,0 grama. Proizvodnja bakrenog nukleinata iz nu- kleinove kiseline. Pet grama nuklein kiseline dodalo se je ka 300 m 3 destilovane vode u nekoj posudi od 800 cm 3 sadržine i pridodala uz nepre¬ stano mješanje rastcpina NaOH u maliim količinama dok je prešla nuklein kiselina u rastopinu. Zatim se je ta rastopina ukiseli- la sa 30%; cctenom kiselinom i dodala ras¬ topina bakrenog sulfata C. P. uz mješanje, dok se nije više stvarao nikakav talog. Smjesta je nastao svjetlozeleni pahuljasti talog. Nakon slegnuča talcga, dekantovala se je nad njim ležeča tekučina. Ostatak se je dva puta isprao dekantacijom, filtrisao isisanjem i isprao do potpunog oslobode- nja cd sulfata. Zatim se je smrvio sa 95% alkoholom u staklenom mužaru, filtrisao i isprao alkoholom. Taj postupak ponovio se je eterom. Dobio se je svjetlozeleni amorf¬ ni prašak, koji je sadržao 9,82%; bakra i 7,05% fosfora. Dobitak 5,08 grama. Proizvodnja bakrenog kazeinata iz kazeina. Sto grama čistog kazeina pristavilo se je sa 1500 cm 3 destilovane vode i dodalo uz neprestano mješanje oko 119 cm 3 običnog NaOH u partijama, dok se je kazein potpu- no rastopio. Zatim se je dodalo uz mješa¬ nje 21 gram bakrenog sulfata, rastoplje- nog u 120 cm 3 vode, dok se nije više oba- rao nikakav talog. Bakreni kazeinat, koji se je izlučio kao zeleni pahuljasti talog, fil¬ trisao se je sisanjem i oslobodio od sulfa¬ ta ispiranjem vodom. Nakon iispiranja sa 50%-nim alkoholom, 59%-nim alkoholom i eterom, osušio se je ostatak na hartiji za filtrisanje na zraku. Dobio se je modroze¬ lenkasti kristalinički prašak, koji je sadržao 4,87% bakra. Dobitak 101 gram. Željezni pepton, koji se je upotrebio za te procese, bio je prašak National Formu- lary fifth Edition, te je sadržao 17,5% že¬ ljeza. Iz gornjeg se može razabrati, da su ra- stopine željeznih i bakrenih spojeva u svim slučajevHma vrlo zgodna sretstva za lječenje malokrvnosti. Ti preparati mogu se napraviti u vrlo ukusnom tekučem obli¬ ku te je potreban dnevno samo vrlo ma- len obrok. Cijena jednog dnevnog obroka je razmjerno niška. Za regeneraciju hae- moglobina postignu se pozitivni rezultati. Slijedeče tablice prikazuju specijalne ra- stopine spojeva, koje su se upotrebile za ovde tabelarno sestavljene spojeve. Rastopina bakrenog nukleinata i željeznog nukleinata. Bakreni nukleinat (proizveden iz kvasa, 29,72% bakra). Željezni nukleinat (proizveden iz kvasa, 8,89% željeza). Rastopina pripravljena tako, da sadrži jedan cm 3 : 0,25 mg bakra ili 0,842 mg bakrenog nu¬ kleinata (29,72% bakra). 0,50 mg željeza ili 5,6 mg željeznog nu- kleina J a (8,89% željeza). 8.00 mg natriumeitrata (United States Pharmokopoia IX Edition). Uobičajen sastav (500 cm rastopine). 0,421 gram bakrenog nukleinata. 2,800 grama željeznog nukleinata. 4.000 grama natriumeitrata. 72.00 cm 3 alkohola. 24.00 cm 3 šečernog sirupa (85:100 H a O). 24,00 cm 3 glicerina. 0,08 cm 3 narandžovog ulja (slatko, tali- jansko). 0,08 cm 3 cctenog etera (aethylacetat, bez vode). 0,01 grama vanilina. destilovane vode toliko, da se dobije 100 cm 3 rastopine. Napomena. Četiri (4) čajne kašike (4 cm 3 svaka) go¬ re navedene bakreno željezne rastopine sa- drži 4,0 mg bakra i 8,0 mg željeza. 30 cm 3 te rastopine sadrže: 0,026 grama bakrenog nukleinata. 0,168 grama željeznog nukleinata. Rastopina bakrenog nukleinata i željeznog peptona. Bakreni nukleinat (napravljen od kvasa, 29,72% bakra). Željezni pepton (National Formulary V Edition-prašak 17,5% željeza). Ta rastopina pripravljena tako, da sadr- ži jedan cm 3 : 0,25 mg bakra ili 0,842 mg bakrenog nu¬ kleinata (29,72% bakra). 0,50 mg željeza ili 2,85 mg željeznog peptona (17,5% željeza). 8.00 mg natriumcitrata (United States Pharmakopoia IX Edition). Upotrebljeni sastav (500 cm 3 rastopine). 0,421 gram bakreni nukleipat. 1,425 grama željezni pepton. 4.000 grama natriumcitrat. 72.00 cm 3 alkohol. 24.00 cm 3 šečern: sirup (85:100 H 2 0). 0,08 cm 3 narandžovo ulje (slatko, tali- jansko). 0,08 cm 3 octeiri eter (aethylacetat, bez vode). 0,01 gram vanilin. destilovane vode toliko, da se dobije 500 cm 3 rastopine. Napomena: Četiri (4) čajne kašike gornje bakrene ra¬ stopine treba da sadrže 4,0 mg bakra i 8,0 mg željeza. 30 cm 3 te rastopine sadrži: 0,025 grama bakrenog nukleinata. 0,085 grama željeznog peptona. Rastopina bakrenog kazeina i željeznog peptona. Bakreni kazein (napravljen od čistog ka¬ zeina (4,87% bakra). Željezni pepton (National Formulary V Edition-prašak, 17,5% željeza). Rastopina sastavljena tako, da sadrži je¬ dan cm 3 : . 0,25 mg bakra ili 5,13 mg bakrenog ka- eina (4,87% bakra). 0,50 mg željeza il: 2,85 mg željeznog peptona (17,5% željeza). 8.00 mg natriumcitrata (United States Pharmakopoia IX Edition). Upotrebljen sastav (500 cm 3 rastopine). 2,565 grama bakrenog kazeina. 1,425 grama željeznog peptona. 4.000 grama natriumcitrata. 72.00 cm 3 alkohola. 24.00 cm 3 šečernog sirupa (85:100 FI 2 0). 24,00 cm 3 glicerina. 0,08 cm 3 narandžovog ulja (siatko, tah- jansko). 0,08 cm 3 octenog etera (aethylacetat, bez vode). 0,01 grama vanilina. Destilovane vode toliko, da se dobije 500 cm 3 rastopine. Napomena: Četiri (4) čajne kašike gornje bakreno- željezne rastopine treba da sadrže 4,0 mg bakra i 8,0 mg željeza. 30 cm 3 te rastopine sadrži: 0,154 grama bakrenog kazeina. 0,085 grama željeznog peptona. Slični ljekoviti preparati sadrže pojedine od ovih sastavina u različitim odnošajima. Slijedeče tablice prikazuju najzgcdnije spo- jeve. Razumije se, da se navedeni spojevi imaju smatrati samo kao primjer i da se mogu u pojedinim slučajevima ti sastavm djelovi mjenjati odnosno nekoji sasma izp¬ ostaviti. Glavno je za te preparate, da sa¬ drži svaki bakra i željeza u zgodnom obli- ku, jer služi željezo za to, da se postigne ponovljenje haemoglobina i asimilacija na tjelo, dočim vrši bakar, kako se to čini, sa¬ mo funkdiju katalizovanja. Rastopina bakrenog nukleinata i željeznog nukleinata. Sastav (1000 cm 3 rastopine) narandžovo ulje (slatko, ta- lijansko) 0,160 cm 3 oc 4 eni eter (aethylacetat Uni¬ ted States Pharmakopoia) 0,160 cm 3 vanilin 0,020 grama destilovane vode za 1000,000 cm 3 Jakost alkohola prednje rastopine 14,25% (teoretično). Jedan maksimalni obrok količina 8 cm 3 , sadrži: 0,601 grama bakra ili 0,0033 grama ba¬ krenog nukleinata. 0,008 grama željeza ili \Q913 grama že- ljezncg nukleinata. Preporučuje se za dnevni obrok: 1—2 čajne kašike u jedrn j čaši rnljeka tri puta ra dan neposredno prije jela. P stupak za proizvodnju rastopine. 1. Rastopi bakreni nukleinat i natriumci- trat u 500 cm 3 destMovane vode uz snažno mješanje. Kada se rastopi bakar, dodaj že- ljezni nukleinat i mješaj dok se rastopi. 2. Rastopi vanilin, orandžovo ulje i octe- ni eter u alkoholu, dodaj tu rastopinu k predašnjoj uz neprestano mješanje. 3. Dodaj gliicerin i šečer i mješaj dok se rastopi. 4. Dopuni na ispravnu količinu dodat¬ kom destilovane vode. Rastopina bakrenog nukleinata i željeznog peptona. Sastav (1000 cm 3 rastopine). Bakreni nukleinat (29,72 % bakra) željezni pepton ljeza) natriumcitrat alkohol šečer glicerin orandžovo ulje (slatko, jansko) 0,421 grama (17,5% že- 5,700 grama 9,000 grama 150,000 cm 3 42,500 grama 50,000 cm 3 tali- 0,160 cm 3 octeni eter (aethylacetat Uni¬ ted States Pharmokopoia) 0,160 cm 3 vanilin 0,020 grama destilovane vode za 1000.000 cm 3 Jakost alkohola gornje rastopine 14,25% (teoretično). Jedan maksimalni obrok (količina 8 cm 3 ) sadrži po prilici: 0,001 grama bakra ili 0,0033 grama ba¬ krenog nukleinata. 0. 008.grama željeza ili 0,0456 grama že¬ ljeznog peptona. Preporučuje se kao dnevni obrok: 1—2 čajne kašike u jednoj punoj čaši mljeka tri puta dnevno neposredno prije jela. Postupak za proizvodnju rastopine: 1. Rastopi bakreni nukleinat i natriumci¬ trat u 500 cm 3 destilovane vode uz snažno mješanje. Čim se bakreni spoj rastopi do¬ daj željezni pepton i mješaj dok se rastopi. 2. Rastopi vanilin, orandžovo ulje i octe¬ ni eter u alkoholu, dodaj tu rastopinu k predašnjoj uz mješanje. 3. Dodaj glicerin i šečer i mješaj dok se rastope. 4. Popuni na ispravm: volumen destilova- nom vodom. Rastopina bakrenog kazeina i željeznog peptona. Sastav (1000 cm 3 rastopine). Bakreni k ;in (4,87% ba¬ kra) 2,565 grama željezni pepton (17,5% že¬ ljeza) 5,709 grama natriumcitrat.' 9,000 grama alkohol 150,000 cm 3 šečer 42,500 grama glicerin 50,050 cm 3 narandžovo ulje (slatko, tali - jansko) 0.160 cm’ octeni eter (aethylacetat, Uni¬ ted States Pharmakopoia) 0,160 cm s vanilin 0,020 grama destilovane vode toliko, da se napravi 1000,000 cm 3 Jakost alkohola gornje rastopine 14,25%) (teoretično). Jedan maksimalni obrok (količina J m 3 ) sadrži po prilici: 0,001 grama bakra ili 0,0205 grama ba¬ krenog kazeina. 0. 008.grama željeza ili 0,0456 grama že¬ ljeznog peptona. Preporučuje se kao dnevni obrok: 1—2 čajne kašike u jednoj punoj čaši mhjeka 3 puta dnevno neposredno prije jela Postupak za proizvodnju rastopine. 1. Rastopi bakreni nukleinat i natriumc;- trat u 500 cm 8 destilovane vode ur snažno mješanje. Kada se bakar rastopi dodaj že¬ ljezni pepton i mješaj dok se rastopi. 2. Rastopi vanilin, orandžovo ulje i oc¬ teni etar u alkoholu i dodaj tu rastopinu k predašnjoj uz mješanje. 3. Dodaj glicerin i šečer i mešaj dok se rastope. 4. Dopuni destilovanom vodom na is- pravni volumen. Patentni zahtjevi: 1. Postupak za proizvodnju jednog ije- kovitog preparata kao sredstvo za regene- risanje haemcglobina, naznačen tune, što se primješa jedan organski željezni spoj ne¬ kom sredstvu za katalizovanje asimilacije željeza. 2. Postupak za proizvodnju jednog lje- kovitog preparata po zahtjevu 1, naznačen time, što se pomješa jedan asimJacioni spoj bakra sa jednim organskim spojem že¬ ljeza. 3. Postupak za proizvodnju jednog lje- kovitog preparata po zahtjevu 1 ili 2, na¬ značen time, što ima bakreni spoj organ¬ sko svojstvo. 4. Postupak za proizvodnju jednog ljeko- vitog preparata po jednom od prednjih zahtjeva, naznačen time, što je spoj bakra kao i spoj željeza u obliku proteina. 5. Postupak za proizvodnju jednog lje- kovitog preparata po jednom od prednjih zahtjeva, naznačen time, što se upotrebi že¬ ljezni spoj u obliku željSznog nukleinata ili željeznog peptona a bakreni spoj u obliku bakrenog nukleinata ili bakrenog kazeina. 6 Postupak za proizvodnju jednog ljeko- vitog preparata po jednom od prednjih nosti neke substance, kao natriumcitrata, zahtjeva, naznačen time, što se primješaju koja ima svojstvo, da učini bakreni sastav- željezna i bakreni sastavni dijelovi u prisut- ni dio rastopljivim. ! f t " ¥