236 Zdrav Vestn | maj – junij 2017 | Letnik 86 NeVrobioL ogija id Očesna Klinika, Univerzitetni klinični center Ljubljana, Ljubljana Korespondenca/ Correspondence: Sofija andjelic, e: sofija.andjelic@kclj.si Ključne besede: lečne epitelne celice; lečna ovojnica; pluripotentnost celic; razmnoževanje celic; selitev celic Key words: lens epithelial cells; lens capsular bag; cell pluripotency; cell proliferation; migration of cells Citirajte kot/Cite as: Zdrav Vestn. 2017; 86:236–43. Prispelo: 16. 11. 2016 Sprejeto: 6. 4. 2017 Nevrobiologija Strokovni članek Zdrav Vestn | maj – junij 2017 | Letnik 86 Vloga lečnih epitelnih celic pri razvoju zamotnitve zadnje lečne ovojnice in pri obnovi leče po operaciji prirojene sive mrene The role of lens epithelial cells in the development of the posterior capsule opacification and in the lens regeneration after congenital cataract surgery Sofija andjelic Izvleček Najpogostejši zaplet po operaciji sive mrene je zamotnitev zadnje lečne ovojnice (angl. posterior capsule opacification, PCO), ki pogosto povzroči poslabšanje vidne funkcije. Vzrok za nastanek PCO je razmnoževanje in selitev lečnih epitelnih celic, ki se med operacijo ne uspejo odstraniti in ostanejo na lečni ovojnici. PCO ima značilnost fibroze, ki se kaže z intenzivnejšim deljenjem, selitvijo, odlaga- njem matriksa in spremembo oziroma prehodom v miofibroblaste. Presenetljivo rezultati najnovejših raziskav kažejo, da so lečne epitelne celice pomembne pri obnovi oz. regeneraciji leče pri novem načinu operacije prirojene sive mrene. Pri tem načinu se odstrani le 1–1,5 mm lečne ovojnice bolj lateralno, tako da ostane večji del lečnega epitela nepoškodovan. Nov način operacije se razlikuje od sedanjega, saj se pri njem ohranijo endogene lečne epitelne celice, ki se ne poskušajo odstraniti oz. uničiti. Lečne epitelne celice se tako lahko po operaciji razmnožujejo znotraj lečne ovojnice. Uspeli so doseči funkcionalno obnovo leče pri kuncih in opicah pa tudi pri otrocih s prirojeno očesno mreno. Za obnovo očesne leče je ključnega pomena pluripotentnost leč- nih epitelnih celic, ki imajo naravo zarodnih celic. Ex vivo kulture eksplantov lečnih ovojnic, na katerih so lečne epitelne celice, lahko uporabljamo za testiranje farmakoloških reagentov, s katerimi spodbujamo ali zaviramo rast lečnih epitelnih celic. Funkcionalnost celic in odgovore na farmakološke reagente lahko ovrednotimo z analizo znotraj- in zunajcelične signalizacije kalcija (Ca 2+ ). Spodbujanje rasti lečnih epitelnih celic je pomembno pri obnovi leče pri novem načinu operacije prirojene sive mrene, nasprotno pa je zaviranje rasti lečnih epitelnih celic pomembno pri prepreče- vanju razvoja PCO. Članek opisuje metode analize delovanja lečnih epitelnih celic, ki jih pridobimo pri operacijah sive mrene ter jih izvajamo v laboratoriju na Očesni kliniki UKC v Ljubljani. Abstract Posterior capsule opacification–PCO is the most common complication after cataract sur- gery. Proliferation and migration of lens epithelial cells that remain in the capsular bag follow- ing cataract surgery can lead to the development of PCO, which is the main cause of deteriora- tion of visual function. PCO shows the classic features of fibrosis, including hyperproliferation, migration, deposition of matrix and its shrinkage and transdifferentiation into myofibroblast. Astonishingly, the results of recent research show the importance of lens epithelium for lens re- generation following congenital cataract surgery. New minimally invasive cataract surgery removes only 1–1.5 mm of lens epithelium more laterally, so the major part of the epithelium remains in the Vloga lečnih epitelnih celic pri razvoju zamotnitve zadnje lečne ovojnice in pri obnovi leče po operaciji prirojene sive mrene 237 Stroko VNi čLaNek Slika 1: Shema strukture leče. capsular bag. Conceptually, the new method differs from the current practice, since it preserves the endogenous epithelial cells of the lens and achieves functional lens regeneration in rabbits and mon- keys as well as in human infants with congenital cataracts. Pluripotency of lens epithelial cells and their stem cell nature are crucial for lens regeneration. Ex vivo cultures of the lens capsule explants can be used for testing the pharmacological agents for stimulating and inhibiting the growth of lens epithelial cells. Functionality of the cells and responses to pharmacological agents can be studied by analyzing the intra- and extra-cellular calcium (Ca 2+ ) signaling. Stimulating the growth of lens epithelial cells is important in lens regeneration while in- hibiting the growth of lens epithelial cells is important in preventing the development of PCO. In the article I described the methods for the analysis of lens epithelial cells after cataract surgeries, which are carried out in the laboratory of the Eye Hospital, University Medical Centre Ljubljana. 1 Uvod Siva mrena je najpogostejši vzrok po- slabšanja vida pri človeku. O sivi mreni govorimo, takrat ko se zmanjša prosoj- nost leče, kar svetlobnim žarkom one- mogoča nemoten prehod svetlobe do očesnega ozadja, s čimer se poslabša vid. Po oceni svetovne zdravstvene organi- zacije ima danes približno 20 milijonov ljudi obojestransko poslabšanje vida za- radi sive mrene, to število pa naj bi leta 2050 doseglo 50 milijonov  (1). Trenutno je glavni način zdravljenja kirurški, tako da je operacija sive mrene najpogostejša očesna operacija. Očesna leča je sestavljena iz treh de- lov: ovojnice, skorje in jedra (Slika 1). Lečna ovojnica je tanka prozorna opna, ki ovija lečo. Sestavljena je večinoma iz kolagena tipa IV in laminina (2). Skorjo sestavljajo epitelne celice, ki postopoma preidejo v vlakna. Enoslojni lečni epitel se nahaja spredaj, pod sprednjo lečno ovojnico. Celice lečnega epitela imajo svoje apikalne površine obrnjene nav- znoter proti jedru in bazalne površine navzven, dotikajoč se lečne ovojnice. Lečni epitel je prva fizikalna in biološka pregrada leče in metabolno najbolj akti- ven del, ki vzdržuje fiziološko ravnoves- je. Ionska črpalka v lečnih epitelnih celi- cah vzdržuje homeostazo in bistrost leče. Sprednji lečni epitel služi tudi kot izvor prekurzorskih celic, iz katerih z moleku- larno in morfološko diferenciacijo na- stanejo lamelne celice. Jedro leče je sestavljeno iz najstarejših celic, praktično brez metabolne aktiv- nosti  (3). Sestavljeno je iz mase skupaj stisnjenih lamelnih celic, ki so spredaj prekrite z enoslojnim epitelom in ovite z lečno ovojnico. Količina lamelnih celic določa funkcionalne lastnosti leče. 2 Razvoj zamotnitve zadnje lečne ovojnice Pri operaciji sive mrene (fakoemulzi- fikaciji) se po odstranitvi sprednje lečne ovojnice skupaj z lečnimi epitelnimi celi- cami dimenzij približno 5,5 mm, odstra- nita jedro in skorja naravne očesne leče in se vstavi nova umetna leča. Operacija je zelo varna in redko povezana z zapleti, se pa po operaciji sorazmerno pogosto pojavlja zamotnitev zadnje lečne ovojni- ce (angl. posterior capsule opacification, 238 Zdrav Vestn | maj – junij 2017 | Letnik 86 NeVrobioL ogija PCO). Po operaciji sive mrene se lahko poslabšanje vidne ostrine zaradi PCO razvije v prbl. 20 % primerov v dobi pe- tih let (4). PCO se običajno razvije iz leč- nih epitelinih celic, ki ostanejo na lečni ovojnici po operaciji sive mrene (fakoe- mulzifikaciji) (4,5). Pri nastanku PCO se ne zamotni sama zadnja lečna ovojnica, ampak se na zadnji lečni ovojnici razvi- jejo neprozorne sekundarne membra- ne  (6-8). Sekundarne membrane nasta- nejo z razmnoževanjem, selitvijo  (9) in preobrazbo (t. i. epitelno-mezenhimskim prehodom) lečnih epitelnih celic (10,11). Tako spremenjene celice so sposobne odlagati kolagen in obnoviti oz. regene- rirati lečna vlakna v prostoru med ume- tno lečo in zadnjo lečno ovojnico  (12). Celice lečnega epitela se razmnožujejo v različnih vzorcih. Klinično se razlikujeta dve osnovni morfološki obliki PCO: fi- brozna oblika in oblika z biseri. Prva se oblikuje z razmnoževanjem in selitvijo lečnih epitelnih celic, ki se nahajajo pod sprednjo lečno ovojnico ter prehodom v miofibroblaste (t. i. epitelno-mezenhim- ski prehod)  (13). Druga oblika, z biseri, nastane iz lečnih epitelnih celic, ki se nahajajo na ekvatorialnem delu leče ali lečnem polu in se regenerirajo v lečna vlakna, ki izražajo kristalin (5,14). 3 Obnova oz. regeneracija očesne leče Najnovejši rezultati raziskav kažejo, da se očesna leča pri novem načinu ope- racije prirojene sive mrene lahko obnovi – regenerira, pri čemer je ključen lečni epitel. Pri novem načinu operacije priro- jene sive mrene se ohrani večji del lečnih epitelnih celic, ki se nato razmnožujejo in oblikujejo funkcionalno lečo. Ope- racija se je izkazala za uspešno tako pri kuncih ter opicah kot tudi pri otrocih s prirojeno očesno mreno (15). Siva mrena je eden najpomembnejših vzrokov za okvaro vida pri otrocih (16). Sedanji način operacije sive mrene pri otrocih vključuje oblikovanje velike od- prtine v sprednji lečni ovojnici premera do 6 mm, katere posledica je velika povr - šina odstranjene ovojnice, s tem pa tudi odstranitev večjega števila lečnih epitel- nih celic. Na ta način se zmanjša pojav PCO. Nedavno so opisali nov način ope- racije prirojene sive mrene, pri kateri z namenom, da bi omogočili obnovo leče, oblikujejo na obodu leče manjši pre- mer odprtine v sprednji lečni ovojnici (<1,5 mm). Tako ostane v lečni ovojnici več lečnih epitelnih celic, iz katerih se obnovi nova funkcionalna leča. Dvanajst otrok s prirojeno sivo mre- no (24 oči) je imelo opravljeno novo minimalno invazivno operacijo, ki omo- goča regeneriranje leče. V kontrolni sku- pini pa je imelo 25 otrok s prirojeno sivo mreno (50 oči) opravljeno standardno operacijo  (15). Nov način operacije ima dve prednosti: precej se zmanjša velikost odstranjene lečne ovojnice, obenem pa se pomakne odprtina odstranjene lečne ovojnice iz osrednje vizualne osi k obo- du. Po operaciji so bili roženica, sprednji prekat in očesno ozadje čisti. Zapletov, povezanih z operacijo niso beležili. Od- prtine v sprednji lečni ovojnici so se za- celile v enem mesecu. Obnovljena čista struktura bikonveksne leče se je obliko- vala tri mesece po posegu. Po šestih me- secih pa niso zabeležili zapletov ali neor- ganizirane regeneracije tkiva. Nova minimalno invazivna kirurška metoda omogoča čisto vidno os, pri če- mer ohrani lečne epitelne celice, ki imajo regenerativni potencial. Lečne epitelne celice pri odraslih člo- veških očeh kažejo tudi povečano rege- nerativno sposobnost po poškodbi  (15), kar nakazuje možnost za obnovo funk- cionalne leče tudi pri starejših bolnikih s starostno sivo mreno. Vloga lečnih epitelnih celic pri razvoju zamotnitve zadnje lečne ovojnice in pri obnovi leče po operaciji prirojene sive mrene 239 Stroko VNi čLaNek 4 Preprečevanje oziroma spodbujanje rasti lečnih epitelnih celic Tako za zamotnitev zadnje lečne ovojnice kot tudi za nastanek nove leče pri novem načinu operacije prirojene sive mrene so odgovorne lečne epitelne celice. Proučevanje zaviralnih mehaniz- mov prehoda epitela v mezenhim je po- membno za preprečitev razvoja PCO. Dokazano je, da transformirajoči faktor rasti (angl. transforming growth factor β, TGFβ) inducira prehod epitela v me- zenhim, kar je osrednjega pomena pri nastanku fibrozne oblike PCO, verjetno preko ERK/MAPK signalne poti (veri- ga proteinov v celici, ki prenaša signal z receptorjev na površini celice do DNK v jedru celice) (17). Fibronektin tipa III pa v zunajceličnem matričnem proteinu tenascin-C igra vlogo pri zaviranju epi- telno-mezenhimskega prehoda (18). Po drugi strani je študij spodbujeval- nih mehanizmov diferenciacije epitela v lamelne celice pomemben za obnovo funkcionalne leče. Rastni faktorji, ki de- lujejo preko tirozin kinaznega receptorja (RTK), kot je fibroblastni rastni faktor (fibroblast growth factor-FGF), imajo normalno regulacijsko vlogo v leči (19). Danes je znano, da proces diferenciaci- je epitela v lamelne celice poganja FGF. Malo pa je znanega o dejavnikih, ki so namenjeni usklajevanju natančne ure- ditve lamelnih celic v funkcionalno lečo. Nedavna raziskava daje vpogled v FGF- aktiviran mehanizem, ki vključuje interakcije med Wnt-Frizzled in Jagged/ Notch signalnimi potmi. Wnt in Notch signalne poti uporabljajo živalske ce- lice za nadzor nad svojo identiteto in obnašanjem med razvojem. Vzajemna interakcija epitelnih in lamelnih celic je ključnega pomena za združitev in vzdr- ževanje zelo urejene tridimenzionalne strukture, ki je osrednjega pomena za delovanje leče (17). Študij razmnoževanja lečnih epitel- nih celic je pomemben, saj želimo pri razvoju PCO razmnoževanje preprečiti, medtem ko želimo pri tvorbi nove leče razmnoževanje spodbuditi. Stopnje raz- množevanja lečnih epitelnih celic so od- visne od starosti. Pri ljudeh imajo lečne epitelne celice zmanjšano odzivnost na mitogeni rastni faktor, FGF-2  (20). To sovpada s starostnim padcem gostote človeških lečnih epitelnih celic v central- nem področju lečnega epitela (21). Ki-67 jedrski protein je celični označevalec, povezan z razmnoževanjem celic. Ne- katere Ki-67-pozitivne celice so zaznali tudi v centralnem, sprednjem področju epitela pri mladih govejih in človeških lečah, kjer ima mlajša leča več celic, ki se razmnožujejo, kot starejša  (22). Raz- množevanje lečnih epitelnih celic je raz- iskano za lečni epitel odrasle miške, pri kateri so našli dve skupini celic: poča- snejše oz. redko ciklirajoče celice, ki se nahajajo v osrednjem področju lečnega epitela in bolj aktivno ciklirajoče celice v perifernem ali germinativnem podro- čju (23). Prvih celic je sorazmerno malo (2–3 %), zato avtorji menijo, da so to do- mnevne zarodne lečne epitelne celice, ki se med homeostazo zelo redko delijo. Ob motnjah se te celice začnejo razmnože- vati in zagotavljajo delitev, ki bo oskrbela osrednjo in germinativno območje s ce- licami, ki imajo zmogljivost nadaljnjih delitev. Interakcija apikalnih površin leč- nih epitelnih celic, ki so obrnjene nav- znoter proti jedru, z notranjim delom leče, kjer se dotikajo apikalne površine lamelnih celic, uravnava razmnoževanje lečnih epitelnih celic (24,25). BMI-1, pro- tein, ki je pri človeku kodiran z genom BMI-1 (B-celični specifični virus mišje levkemije), je potreben za vzdrževanje in obnovo endogenih lečnih epitelnih celic. 240 Zdrav Vestn | maj – junij 2017 | Letnik 86 NeVrobioL ogija Slika 2: Primer pritrjenega eksplanta človeške sprednje lečne ovojnice z rastočim lečnimi epitelnimi celicami v petrijevki. Na spodnjih slikah sta pri večji povečavi prikazani dve področji lečne ovojnice z rastočim lečnimi epitelnimi celicami. Izguba BMI-1 vodi do zmanjšanja zmo- gljivosti razmnoževanja lečnih epitelnih celic in nastanka sive mrene (15). 5 Metode analize lečnih epitelnih celic po operaciji sive mrene pri nas Za študije vloge človeškega lečnega epitela, tako njegovega regenerativne- ga potenciala kot tudi razvoja PCO, se lahko uporabijo sprednje lečne ovojnice, pridobljene pri operaciji sive mrene (26), iz katerih vzgojimo ex vivo kulture ek- splantov lečnih ovojnic (27,28). Na Oče- sni kliniki v Ljubljani uporabljamo pri standardni operaciji sive mrene odstra- njene sprednje lečne ovojnice, ki se sicer običajno zavržejo. Strukturo lečnega epi- tela in razlike apikalne in bazalne strani smo pokazali z uporabo vrstičnega in transmisijskega elektronskega mikro- skopa in konfokalnega mikroskopa. Z vsako od treh metod, ki smo jih uporabi- li, smo prikazali enake morfološke zna- čilnosti, razširitve in zaplete citoplazem- ske membrane lečnih epitelnih celic na meji z lečno ovojnico, medtem ko se je izkazalo, da je apikalna površina lečnih epitelnih celic gladka  (29). Z uporabo vrstičnega in transmisijskega elektron- skega mikroskopa smo raziskovali tudi epitel pri bolnikih z različnimi tipi sive mrene. Pri bolnikih z intumescentno sivo mreno ima lečni epitel naslednje značilnosti: otekle celice, sferične struk- ture celic in degradirane celice (30). Pri bolnikih z retinitisno pigmentozo pa smo opazili naslednje značilnosti lečne- ga epitela: luknje in degradacije epitela z dimenzijami od <1 μm do več kot 50 μm (31). Luknje v lečnem epitelu imajo verjetno vlogo pri razvoju sive mrene. Homeostaza znotrajcelične koncentra- cije kalcija (Ca 2+ ) predstavlja splošni in- dikator delovanja celic. Pri študiji vloge lečnega epitela in analizi znotraj- in zu- najcelične Ca 2+ signalizacije na človeških sprednjih lečnih epitelnih celicah smo pokazali, da pri bolj razviti sivi mreni ce- lice pokažejo počasnejši skupen odziv na stimulacijo in manj izrazito prostorsko- -časovno povezovanje celic. Medcelična omrežja so redkejša in bolj ločena kot pri blagi sivi mreni (32). Pokazali smo tudi krčenje lečnih epitelnih celic po nespe- cifični stimulaciji, ki je vsaj deloma ne- odvisno od sprememb v znotrajcelični koncentraciji Ca 2+ . Krčenje lahko sproži mehanski dražljaj, odgovor je hiter in celice se po koncu dražljaja vrnejo v pr- votno neskrčeno stanje  (33). To krčenje celic lahko povzroči večjo permeabilnost za vodo, kar bi lahko bil mehanizem na- Vloga lečnih epitelnih celic pri razvoju zamotnitve zadnje lečne ovojnice in pri obnovi leče po operaciji prirojene sive mrene 241 Stroko VNi čLaNek Slika 3: Primer sprememb znotrajcelične koncentracije kalcija lečnih epitelnih celic zraslih v kulturi iz eksplanta lečne ovojnice kot odgovor na mehansko stimulacijo. Mesto stimulacije je označeno s puščico na prvi sliki, ki pokaže morfologijo celic pri 360 nm. časovne spremembe znotrajcelične koncentracije kalcija za 5 izbranih področij so prikazane spodaj, področja so označena s krogi enake barve. barvne slike skozi razmerje 360/380 nm prikazujejo dvig koncetracije kalcija v izbranih trenutkih: rdeča barva prikazuje najvišjo koncentracijo, rumena manjšo in zelena še manjšo. stanka sive mrene pri vstavitvi fakičnih leč, če se le-te dotikajo sprednje lečne ovojnice. V zvezi z razvojem PCO in z obno- vo leče smo pokazali, da ima sprednji lečni epitel odraslih pluripotentne lečne epitelne celice. Človeško sprednjo lečno ovojnico v kulturi naselijo lečne epi- telne celice, ki se razmnožujejo in seli- jo, kar kaže na njihovo pluripotentnost ali domnevno naravo zarodnih celic. Z imunskim barvanjem smo pokazali, da se Ki-67 jedrski protein, ki je povezan z razmnoževanjem celic, in Sox2 tran- skripcijski faktor, ki je ključnega pome- na za pluripotentnost nediferenciranih embrionalnih zarodnih celic, izražata v lečnih epitelnih celicah, zraslih na člove- ški sprednji lečni ovojnici (27). Zarodne in progenitorske celice, ki izražajo Sox2, so pomembne za regeneriranje tkiva in preživetje pri miših (34). Pri operaciji sive mrene pridobljene sprednje lečne ovojnice uporabljamo tudi za gojenje ex vivo kultur eksplan- tov lečnih ovojnic, z nasaditvijo lečne ovojnice v petrijevko. Da bi lečne epi- telne celice migrirale na steklo petrijev- ke, mora biti lečna ovojnica pritrjena na dno petrijevke. Razvili smo metodo za pritrjevanje eksplanta s pomočjo vi- skoelastika  (28). Primer pritrjenega ek- splanta človeške sprednje lečne ovojnice z rastočim lečnimi epitelnimi celicami je prikazan na Sliki 2. Ex vivo kultivirani eksplant lečne ovojnice z rastočim leč- nimi epitelnimi celicami lahko služi kot model za testiranje različnih fizičnih in farmakoloških učinkov. Pokazali smo, da usmerjena in lokalizirana mikroplazma povzroča od odmerka odvisne morfolo- ške spremembe celic in apoptozo ex vivo gojenih človeških lečnih epitelnih celic. Rezultati kažejo, da se plazma, ki skozi mikropipeto pride do posamezne celice, lahko uporabi za selektivno inducira- nje smrti lečnih epitelnih celic, ki osta- nejo na lečni ovojnici po operaciji sive mrene in tako prepreči njihovo selitev k zadnji ovojnici leče ter tako nastanek PCO (35). Funkcijo rastočih lečnih epi- telnih celic eksplanta lečne ovojnice lah- ko analiziramo z meritvami, ki pokažejo spremembe znotrajcelične koncentracije Ca 2+ , ki je kazalec delovanja celic, kot odgovor na različne fizične in farmako- loške dražljaje. Slika 3 kaže primer spre- memb znotrajcelične koncentracije Ca 2+ lečnih epitelnih celic, zraslih v kulturi iz eksplanta lečne ovojnice, kot odgovor na mehansko stimulacijo in pokaže zunaj- celično Ca 2+ signalizacijo. Dvig koncen- tracije Ca 2+ ni istočasen na vseh izbranih področjih, temveč pokaže časovni zao- stanek, kar kaže na to, da signal potuje. Zunajcelična Ca 2+ signalizacija nakazuje funkcionalne stike med celicami, ki se 242 Zdrav Vestn | maj – junij 2017 | Letnik 86 NeVrobioL ogija lahko primerjajo med strnjenimi in ne- strnjenimi lečnimi epitelnimi celicami. Podobne raziskave so pomembne za te- stiranje farmakoloških reagentov in štu- dije spodbujanja in zaviranja rasti lečnih epitelnih celic. 6 Zaključki T ako za zamotnitev zadnje lečne ovoj- nice – PCO kot tudi za obnovo leče pri novem načinu operacije prirojene sive mrene so odgovorne lečne epitelne celi- ce. Nov minimalno invaziven način ope- racije prirojene sive mrene pri otrocih ohrani endogene zarodne lečne epitelne celice, s čimer doseže funkcionalno ob- novo leče. Pluripotentnost lečnih epitel- nih celic, ki imajo značilnosti zarodnih celic, je ključnega pomena za regenerira- nje očesne leče. Ex vivo kulture človeških lečnih epitelnih celic lahko služijo kot model za testiranje različnih fizičnih in farmakoloških učinkov za spodbujanje ali zaviranje rasti. Funkcionalnost celic in odgovori na različna draženja se lah- ko proučujejo z analizo znotraj in zunaj- celične Ca 2+ signalizacije. Spodbujanje rasti lečnih epitelnih celic je pomembno pri obnovi leče po operaciji prirojene sive mrene, medtem ko je zaviranje ra- sti pomembno za preprečevanje razvoja PCO. Literatura 1. Fan X, Monnier VM, Whitson J. Lens glutathione homeostasis: Discrepancies and gaps in knowled- ge standing in the way of novel therapeutic appro- aches. Experimental Eye Research. 2016. 2. Danysh BP , Duncan MK. The lens capsule. Experi- mental Eye Research. 2009;88(2):151–64. 3. McNulty R, Wang H, Mathias RT, Ortwerth BJ, Truscott RJW, Bassnett S. Regulation of tissue oxygen levels in the mammalian lens. The Journal of Physiology. 2004;559(3):883–98. 4. Duncan G, Wang L, Neilson GJ, Wormstone IM. Lens Cell Survival after Exposure to Stress in the Closed Capsular Bag. Investigative Opthalmology & Visual Science. 2007;48(6):2701. 5. Apple DJ, Solomon KD, T etz MR, Assia EI, Holland EY, Legler UFC, et al. Posterior capsule opacifica- tion. Survey of Ophthalmology. 1992;37(2):73–116. 6. Hiles DA, Johnson BL. The role of the crystalline lens epithelium in postpseudophakos membrane formation. American Intra-Ocular Implant Socie- ty Journal. 1980;6(2):141–7. 7. McDonnell PJ, Green WR, Maumenee AE, Iliff WJ. Pathology of Intraocular Lenses in 33 Eyes Exami- ned Postmortem. Ophthalmology. 1983;90(4):386– 403. 8. Roy FH. After-cataract: clinical and pathologic evaluation. Ann Ophthalmol. 1971;3(12):1364–6. 9. Lauffenburger DA, Horwitz AF. Cell Migration: A Physically Integrated Molecular Process. Cell. 1996;84(3):359–69. 10. Wormstone IM, Wang L, Liu CSC. Posterior cap- sule opacification. Experimental Eye Research. 2009;88(2):257–69. 11. Wormstone IM, Wang L, Liu CSC. Posterior cap- sule opacification. Experimental Eye Research. 2009;88(2):257–69. 12. Awasthi N. Posterior Capsular Opacification. Ar- chives of Ophthalmology. 2009;127(4):555. 13. McDonnell PJ, Zarbin MA, Green WR. Posteri- or Capsule Opacification in Pseudophakic Eyes. Ophthalmology. 1983;90(12):1548–53. 14. Saika S. Relationship between posterior capsu- le opacification and intraocular lens biocom- patibility. Progress in Retinal and Eye Research. 2004;23(3):283–305. 15. Lin H, Ouyang H, Zhu J, Huang S, Liu Z, Chen S, et al. Lens regeneration using endogenous stem cells with gain of visual function. Nature. 2016;531(7594):323–8. 16. Gogate P , Kalua K, Courtright P . Blindness in Child- hood in Developing Countries: Time for a Reas- sessment? PLoS Medicine. 2009;6(12):e1000177. 17. Lovicu FJ, Shin EH, McAvoy JW. Fibrosis in the lens. Sprouty regulation of TGFβ-signaling pre- vents lens EMT leading to cataract. Experimental Eye Research. 2016;142:92–101. 18. Tiwari A, Ram J, Luthra-Guptasarma M. Targe- ting the fibronectin type III repeats in tenascin-C inhibits epithelial-mesenchymal transition in the context of posterior capsular opacification. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2014;56(1):272–83. 19. Zhao G, Wojciechowski MC, Jee S, Boros J, McA- voy JW, Lovicu FJ. Negative regulation of TGFβ- induced lens epithelial to mesenchymal transition (EMT) by RTK antagonists. Experimental Eye Re- search. 2015;132:9–16. 20. Dawes LJ, Duncan G, Wormstone IM. Age-Rela- ted Differences in Signaling Efficiency of Human Lens Cells Underpin Differential Wound Hea- ling Response Rates following Cataract Surgery. Investigative Opthalmology & Visual Science. 2013;54(1):333. 21. Guggenmoos-Holzmann I, Engel B, Henke V , Na- umann GO. Cell density of human lens epithelium in women higher than in men. Invest. Ophthalmol Vis Sci. 1989;30(2):330–2. Vloga lečnih epitelnih celic pri razvoju zamotnitve zadnje lečne ovojnice in pri obnovi leče po operaciji prirojene sive mrene 243 Stroko VNi čLaNek 22. Wu JJ, Wu W, Tholozan FM, Saunter CD, Girkin JM, Quinlan RA. A dimensionless ordered pull- -through model of the mammalian lens epitheli- um evidences scaling across species and explains the age-dependent changes in cell density in the human lens. Journal of The Royal Society Interfa- ce. 2015;12(108):20150391. 23. Zhao G, Wojciechowski MC, Jee S, Boros J, McA- voy JW, Lovicu FJ. Negative regulation of TGFβ- induced lens epithelial to mesenchymal transition (EMT) by RTK antagonists. Experimental Eye Re- search. 2015;132:9–16. 24. Shi Y, De Maria A, Lubura S, iki H, Bassnett S. The Penny Pusher: A Cellular Model of Lens Growth. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 2014;56(2):799–809. 25. Rakic J-M, Galand A, Vrensen GFJM. Separation of Fibres from the Capsule Enhances Mitotic Acti- vity of Human Lens Epithelium. Experimental Eye Research. 1997;64(1):67–72. 26. Andjelić S, Zupančič G, Perovšek D, Robič T, Hawlina M. Anterior lens capsule as a tool to study the physiology of human lens epithelial cells. Zdrav Vestn / Slovenian Medical Journal 2010;79:I-123–30. 27. Andjelić S, Drašlar K, Lumi X, Yan X, Graw J, Fa- cskó A, et al. Morphological and proliferative stu- dies on ex vivocultured human anterior lens epi- thelial cells–relevance to capsular opacification. Acta Ophthalmologica. 2015;93(6):e499-e506. 28. Andjelic S, Lumi X, Veréb Z, Josifovska N, Facskó A, Hawlina M, et al. A Simple Method for Establi- shing AdherentEx VivoExplant Cultures from Hu- man Eye Pathologies for Use in Subsequent Calci- um Imaging and Inflammatory Studies. Journal of Immunology Research. 2014;2014:1–10. 29. Andjelic S, Drašlar K, Hvala A, Lopic N, Strancar J, Hawlina M. Anterior lens epithelial cells atta- chment to the basal lamina. Acta Ophthalmologi- ca. 2015;94(3):e183-e8. 30. Andjelic S, Drašlar K, Hvala A, Hawlina M. Anteri- or lens epithelium in intumescent white cataracts– scanning and transmission electron microscopy study. Graefe‘s Archive for Clinical and Experi- mental Ophthalmology. 2015;254(2):269–76. 31. Andjelic S, Draslar K, Hvala A, Hawlina M. An- terior lens epithelium in cataract patients with retinitis pigmentosa–scanning and transmission electron microscopy study. Acta Ophthalmologi- ca. 2015;93:n/a-n/a. 32. Gosak M, Markovič R, Fajmut A, Marhl M, Hawli- na M, Andjelić S. The Analysis of Intracellular and Intercellular Calcium Signaling in Human Ante- rior Lens Capsule Epithelial Cells with Regard to Different Types and Stages of the Cataract. PloS one. 2015;10(12):e0143781. 33. Andjelić S, Zupančič G, Perovšek D, Hawlina M. Human anterior lens capsule epithelial cells con- traction. Acta Ophthalmologica. 2011;89(8):e645– 53. 34. Arnold K, Sarkar A, Yram Mary A, Polo Jose M, Bronson R, Sengupta S, et al. Sox2+ Adult Stem and Progenitor Cells Are Important for Tissue Re- generation and Survival of Mice. Cell Stem Cell. 2011;9(4):317–29. 35. Recek N, Andjelić S, Hojnik N, Filipič G, Lazo- vić S, Vesel A, et al. Microplasma Induced Cell Morphological Changes and Apoptosis of Ex Vivo Cultured Human Anterior Lens Epithelial Cells – Relevance to Capsular Opacification. PloS one. 2016;11(11):e0165883.