RAZISKAVE IN RAZVOJ
RAZISKAVE IN RAZVOJ
Papir za notranjost revije PAPIR je prispevala Papirnica Vev~e, Biomatt 115 g/m
2
Damjan Balabanič
1
, Bojana Žegura
2
, Aleksandra Krivograd Klemenčič
3,4
, Metka Filipič
2
28
Papir za notranjost revije PAPIR je prispevala Papirnica Vev~e, Biomatt 115 g/m
2
29
UGOTAVLJANJE MUTAGENE/
GENOTOKSI^NE AKTIVNOSTI ODPADNIH 
VOD PAPIRNE INDUSTRIJE
determInatIOn Of mutaGenIc/GenOtO xIc 
actIvIty Of P aPer mIll wastewaters 
IZVLE^EK
Spremljanje kakovosti odpadnih in povr{inskih vod temelji na spremljanju fizikalno-kemijskih parametrov. Vendar pa s kemijskimi 
analizami prisotnosti genotoksi~nih snovi pogosto ne ugotovimo, ker so navadno prisotne pod mejo zaznavanja analitskih 
metod. Poleg tega analitske metode ne pokažejo genotoksi~nega potenciala celotnega vzorca, {e zlasti, ~e med posameznimi 
onesnaževali pride do medsebojnih antagonisti~nih ali sinergisti~nih vplivov. Z ustreznimi biolo{kimi testi lahko zaznamo odziv na 
vse {kodljive snovi, ki so v vodi, tudi ~e ne poznamo njihove identitete in medsebojnih interakcij. Zato pripomorejo k preseganju 
nekaterih pomanjkljivosti v kemijsko specifi~nem pristopu ocenjevanja kakovosti odpadnih in povr{inskih vod.
V tej raziskavi smo primerjali citotoksi~nost in genotoksi~nost vzorcev odpadnih vod dveh papirnic, od katerih ena kot surovino za 
izdelavo papirnih izdelkov uporablja celulozna vlakna, druga pa reciklirana vlakna. Vzorce odpadne vode, ki smo jih odvzeli pred 
in za ~istilno napravo ter vzorce prejemne vode odvzete nad in pod izpustom odpadne vode v vodotok smo testirali s testoma 
z bakterijami Salmonella typhimurium: SOS/umuC in Ames MPF 98/100 Aqua™ test, ter s testom komet na ~love{kih jetrnih 
celicah (celice HepG2). Ugotovili smo, da so bile mutagene in genotoksi~ne le odpadne vode papirne industrije, ki za izdelavo 
papirnatih izdelkov uporablja reciklirana vlakna. Poleg tega smo ugotovili, da je anaerobno in aerobno ~i{~enje odpadne vode, 
iz te papirnice, uspe{no odstranilo in/ali inaktiviralo spojine, ki so bile odgovorne za mutagenost za bakterije, ne pa tudi spojin, 
odgovornih za genotoksi~nost za celice HepG2. Predlagamo nadaljnje raziskave, ki bodo omogo~ile identifikacijo genotoksi~nih 
snovi ter na osnovi tega ustrezne ukrepe za njihovo zmanj{anje v izpustu v vodotok. Ta raziskava potrjuje pomembnost uporabe 
biolo{kih testov za kontrolo kakovosti odpadnih in povr{inskih voda.
Klju~ne besede: papirna industrija, odpadne vode, biolo{ki testi, citotoksi~nost, mutagenost, genotoksi~nost.
ABSTRACT
Assessment of wastewater and surface water quality is based on monitoring of physico-chemical parameters. However, the 
chemical analyses do not always show the presence of genotoxic substances, as they are usually present in concentrations that 
are below the detection limit of analytical methods. In addition, analytical methods do not show genotoxic potential of the whole 
sample, especially if there are antagonistic or synergistic effects of individual pollutants present. With appropriate biological tests 
we can detect response to the harmful substances in water, even if we do not know their identities and interactions. Therefore 
biological tests can contribute to overcoming deficiencies in chemical approach of wastewater and surface water quality 
assessment.
In present study we compared the cytotoxic and genotoxic activity of wastewater samples from two paper mills, one of them 
is using cellulose fibres and the other recovered fibres for manufacturing of paper products. Wastewater samples were taken 
before and after the biological treatment plant and the receiving water samples were taken above and below the discharge of 
wastewater into the river. Samples were tested with two bacterial tests with Salmonella typhimurium: SOS/umuC and Ames 
MPF 98/100 Aqua™ test and with the comet assay in human liver cells (HepG2 cells). The results showed that only wastewater 
from paper mill that uses recovered fibres for paper production was mutagenic and genotoxic. The anaerobic and aerobic 
biological treatment of wastewater from the paper mills successfully removed and/or inactivated compounds responsible for 
genotoxic effect on HepG2 cells. We suggest further research that will enable the identification of genotoxic substances and 
the appropriate measures for reduction of these substances in effluents entering the watercourse. This study confirms the 
importance of using biological tests for quality control of wastewater and surface water.
Key words: paper industry, wastewaters, bioassays, cytotoxicity, mutagenicity, genotoxicity.
1. UVOD
Na kakovost voda vplivajo najrazli~nej{a 
toksi~na onesnažila, ki izvirajo iz 
industrije, kmetijstva in gospodinjskih 
komunalnih odplak. Pri tem so industrijske 
odpadne vode in iztoki iz ~istilnih naprav 
pomemben to~kovni vir onesnaženja. 
Papirna industrija v tem pogledu ni izjema. 
Papirna industrija je ena od najve~jih 
industrijskih porabnic vode �1�, posledica 
so velike koli~ine odpadnih voda, ki 
lahko vsebujejo organske snovi, {kodljive 
za organizme in okolje. Pri proizvodnji 
papirnatih izdelkov uporablja papirna 
industrija vlaknine, polnila in kemikalije, 
med katerimi so zelo pomembni biocidi, 
alkilfenolne spojine, policikli~ni aromatski 
ogljikovodiki (PAH) in ftalati. Ve~ina teh 
snovi je toksi~nih, {tevilne med njimi pa so 
tudi genotoksi~ne. Spremljanje kakovosti 
odpadnih in povr{inskih vod temelji na 
spremljanju fizikalno kemijskih parametrov. 
Vendar pa so koncentracije genotoksi~nih 
snovi v odpadnih in povr{inskih voda 
pogosto pod mejo dolo~ljivosti s 
kemijskimi analitskimi metodami, zato je 
zelo težko oceniti tveganja zaradi njihove 
prisotnosti.  
Zgolj na osnovi kemijskih analiz ni mogo~e 
predvideti genotoksi~nosti celotnega 
vzorca zaradi morebitnih interakcij med 
komponentami kompleksnih vzorcev 
vod, ki lahko privedejo do sinergisti~nih 
u~inkov �2�. Alternativni pristop za oceno 
genotoksi~nosti kompleksnih vzorcev, ki se 
~edalje bolj uveljavlja, je uporaba biolo{kih 
testov, ki pokažejo odziv na delovanje 
celotnega vzorca.
V predstavljeni raziskavi smo primerjali 
citotoksi~no, mutageno in/ali 
genotoksi~no aktivnost odpadnih vod iz 
dveh papirnic z razli~nima proizvodnima 
procesoma, pred in po biolo{kem ~i{~enju 
ter gorvodno in dolvodno od izpusta 
odpadne vode v vodotok. Znano je, da 
noben test genotoksi~nosti ne zazna vseh 
možnih genotoksi~nih snovi, ki imajo 
razli~ne mehanizme delovanja. Zato je 
potrebno uporabljati kombinacije testov. 
V na{i raziskavi smo uporabili kombinacijo 
dveh bakterijskih testov: SOS/umuC s S. 
typhimurium TA1535/pSK1002, in Ames 
MPF 98/100 Aqua™ test, in komet test s 
celicami ~love{kih jeter HepG2.
2. MATERIALI IN METODE
Vzorci odpadnih vod
Vzorce vod smo odvzeli v dveh papirnicah 
z razli~nima proizvodnima procesoma. 
Papirnica 1 kot surovino uporablja 
celulozna vlakna, papirnica 2 pa 
reciklirana vlakna. Izvedli smo enkratni 
odvzem vzorcev odpadnih vod pred in 
za aerobno ~istilno napravo (papirnica 
1). Papirnica 2 ima pred aerobno ~istilno 
napravo tudi anaerobno ~istilno napravo, 
zato smo vzeli vzorec tudi tu. Vzorce 
prejemnih vod iz vodotoka smo odvzeli 
nad in pod izpustom odpadne vode. 
Skupaj smo odvzeli 5 vzorcev odpadnih in 
4 vzorce povr{inskih vod.
Pred biolo{kim testiranjem smo vzorce 
odpadnih vod filtrirali (Whatman cellulose 
acetate syringe filter, 0.2 µm) in uravnali 
pH na 7±0.2 (v skladu s standardom ISO 
5667-16-1998) [3].
Biolo{ki testi
Za dolo~evanje citotoksi~nosti, 
mutagenosti in/ali genotoksi~nosti 
odvzetih vzorcev odpadnih in povr{inskih 
vod smo uporabili bakterijska testa SOS/
umuCin Ames MPF 98/100 Aqua™ test, 
ter testni sistem s ~love{kimi jetrnimi 
celiamiHepG2, kje smo genotoksi~nost 
vzorcev dolo~ili s testom komet.
BAKTERIJSKA TESTA
SOS/umuC test
Testni organizem so genetsko 
spremenjene bakterije 
Salmonellatyphimurium sev TA1535/
pSK1002. Test smo izvedli po klasi~ni 
metodi z nekaterimi spremembami, 
prilagojenimi za ugotavljanje 
citotoksi~ne in genotoksi~ne aktivnosti 
nekoncentriranih vodnih vzorcev, 
kot je opisano v ISO standardu �4�. 
Citotoksi~nost vzorcev smo dolo~ili 
spektrofotometri~no z merjenjem 
absorbance celi~ne suspenzije pri valovni 
dolžini 600 nm, genotoksi~nost pa z 
β-galaktozidaze aktivnosti z merjenjem 
pretvorbe substrata o-nitrofenil-ß-D-
galaktopiranozida (ONPG) v rumeno 
obarvan produkt, ki ga dolo~imo z 
merjenjem absorbance pri 420 nm. 
Bakterijske celice niso metabolno 
aktivne, zato smo testiranje izvedli brez 
in z dodatkom sistema za metabolno 
aktivacijo (S9-zmes).
Ames MPF 98/100 Aqua™ test
Ames MPF 98/100 Aqua™ test je 
kolorimetri~na razli~ica klasi~nega 
Ames testa, ki vklju~uje seva Salmonella 
typhimurium sev TA 98 in TA100�5�. 
Testni sistem zaznava povratne mutacije 
zaradi premika bralnega okvirja in 
povratne mutacije zaradi zamenjave 
parov baz. Test smo izvedli po navodilih 
proizvajalca �6�. Vzorce smo testirali pri 
red~itvi 1:1. V primeru pozitivnega odziva 
smo testiranje ponovili {e pri red~itvah 
1:2 in 1:4. Mutageno aktivnost vzorcev 
smo izra~unali s pomo~jo programa 
proizvajalca [6]. Testiranje smo izvedli 
brez in z dodatka sistema za metabolno 
aktivacijo (S9-zmes).
TESTIRANJE S ^LOVEŠKIMI JETRNIMI 
CELICAMI HepG2
Za ugotavljanje citotoksi~nosti in 
genotoksi~nosti vzorcev odpadnih vod 
z evkariontskimi celicami smo uporabili 
metabolno aktivne celice ~love{kega 
hematoma HepG2. Izbrali smo jih, ker 
so uveljavljen model za ugotavljanje 
genotoksi~nosti in ker zaradi svoje 
ohranjene metabolne aktivnosti bolj{e 
odražajo morebitne {kodljive u~inke pri 
ljudeh, kot drugi testni sistemi.
MTT test
S testom MTT dolo~amo citotoksi~nost 
vzorcev za sesalske celice. Test smo 
izvedli po postopku, kot ga je opisal 
Mossman (1983)�7�. HepG2 celice smo 
izpostavili 30 % vzorca vode, ki je najvi{ja 
možna koncentracija pri testiranju 
nekoncentriranih vzorcev vod za 24 ur.
Komet test
Test komet je preprosta, hitra in ob~utljiva 
metoda za dolo~anje po{kodb DNK 
molekul posameznih evkariontskih celic. 
Test komet smo izvedli po postopku, kot 
ga je opisal Singh (1988) �8�, 
s spremembami, kot je opisano v Žegura 
in Filipi~ (2004) �9�. Za vsako skupino smo 
analizirali 50 kometov.
3. REZULTATI IN DISKUSIJA
V predstavljeni raziskavi, v kateri smo 
testirali citotoksi~nost in genotoksi~nost 
vzorcev odpadnih vod dveh papirnic z 
razli~nima proizvodnima procesoma, smo 
ugotovili, da odpadna voda iz papirnice, 
ki pri proizvodnji papirja uporablja 
celulozna vlakna, ni imela citotoksi~nih, 
mutagenih in/ali genotoksi~nih lastnosti, 
medtem ko so bili vzorci odpadnih vod 
iz papirne industrije, ki pri proizvodnji 
papirja uporablja reciklirana vlakna, 
genotoksi~ni.
Testiranje vzorcev odpadnih vod in 
vodotokov nad in pod izpustom odpadne 
vode s SOS/umuC testom s sevom 
S. typhimurium TA 1535/pSK1002 z 
dodatkom in brez dodatka metabolne 
aktivacije S9 je pokazalo, da noben od 
odvzetih vzorcev ni deloval citotoksi~no 
in/ali genotoksi~no na bakterijske celice 
(rezultati niso prikazani).
Pri testiranju mutagene aktivnost vzorcev 
odpadnih in povr{inskih vod z Ames MPF 
98/100 Aqua™ testom z bakterijskimi 
celicami w. Vzorec odpadne vode 
papirnice 2, odvzete pred ~i{~enjem, je 
bil mutagen, vendar le pri testiranju z 
dodatkom metabolne aktivacije, medtem 
ko vzorca, odvzeta po aerobnem in 
anaerobnem ~i{~enju, nista bila mutagena 
(tabela 1). Prav tako nista bila mutagena 
vzorca, odvzeta iz vodotoka nad in pod 
izpustom odpadne vode iz te papirnice. 
To kaže, da so bili v neo~i{~eni odpadni 
vodi prisotni mutageni, ki potrebujejo 
metaboli~no aktivacijo. Reciklirana 
vlakna lahko vsebujejo ostanke razli~nih 
dodatkov in tiskarskih barv, med katerimi 
so nekatere genotoksi~ne, kar je verjetno 
razlog za mutageno aktivnost te odpadne 
vode. Odsotnost mutagene aktivnosti v 
vzorcih odpadne vode po anaerobnem in 
aerobnem ~i{~enju pa kaže, da obstoje~a 
~istilna naprava u~inkovito odstrani in/ali 
inaktivira bakterijske mutagene.
Tabela 1: Mutagena aktivnost vzorcev 
odpadnih in povr{inskih vod papirnice 1 in 
papirnice 2, dolo~ena z Ames MPF 98/100 
Aqua™ testom
Testiranje citotoksi~nosti vzorcev z MTT 
testom smo izvedli pred izvedbo komet 
testa, z namenom, da za ugotavljanje 
genotoksi~nosti izberemo netoksi~ne 
koncentracije vzorcev. Rezultati MTT testa 
so pokazali, da noben vzorec odpadnih 
ali povr{inskih vod pri koncentraciji 30 
% vzorca ni deloval citotoksi~no na 
celice HepG2. Zato smo za testiranje 
genotoksi~nosti s testom komet kot 
najvi{jo testirano koncentracijo uporabili 
30 % vzorca.

RAZISKAVE IN RAZVOJ
RAZISKAVE IN RAZVOJ
Papir za notranjost revije PAPIR je prispevala Papirnica Vev~e, Biomatt 115 g/m
2
31
Papir za notranjost revije PAPIR je prispevala Papirnica Vev~e, Biomatt 115 g/m
2
30
Test komet s HepG2 celicami je pokazal, 
da vzorci odpadnih vod pred in po 
biolo{kem ~i{~enju iz papirnice 1, kot 
tudi vzorci vod iz vodotoka nad in 
pod izpustom odpadne vode, niso bili 
genotoksi~ni (slika 1).
Vzorci odpadnih vod papirnice 2 pa so 
bili genotoksi~ni, in sicer pred ~i{~enjem, 
kot tudi po anaerobnem in aerobnem 
~i{~enju (slika 2). Pri vseh vzorcih smo 
signifikantno pove~anje po{kodb DNA 
zaznali le pri najvi{ji testirani koncentraciji 
(30 %). Pri tem je bila po{kodovanost 
celic, izpostavljenih vzorcu neo~i{~ene 
odpadne vode in vzorcu, odvzetem 
po aerobnem ~i{~enju, nekoliko ve~ja 
od po{kodovanosti, ki jo je povzro~ila 
izpostavljenost vzorcu vode po 
anaerobnem ~i{~enju. Po{kodbe DNA, ki 
so bile nekoliko manj{e, kot pri vzorcu po 
anaerobnem ~i{~enju, pa je povzro~il tudi 
vzorec vodotoka odvzet pod izpustom 
odpadne vode.
Primerjava rezultatov testiranja z Ames 
MPF 98/100 Aqua™ testom in testom 
komet s celicami HepG2 kaže, da so 
bile v neo~i{~eni odpadni vodi papirnice 
2 prisotne genotoksi~ne snovi, ki so 
mutagene za bakterije in genotoksi~ne 
za ~love{ke celice. Genotoksi~nost 
vzorcev odpadne vode po anaerobnem 
in aerobnem ~i{~enju, ki za bakterije 
nista bila mutagena, pri HepG2 celicah 
pa sta povzro~ila po{kodbe DNA, pa 
kaže, da so za mutagenost za bakterije 
in genotoksi~nost za celice odgovorne 
razli~ne snovi. Možno je, da so nastali 
genotoksi~ni produkti pretvorbe, lahko 
pa gre tudi za sinergisti~ne u~inke, ki jih 
LITERATURA
�1� POKHREL, D. in VIRARAGHAVAN, T. 
Treatment of pulp and paper mill wastewater 
– a review. Science of the Total Environment, 
2004, vol. 133, {t. 1–3, str. 37–58.
�2� ŽEGURA, B., HEATH, E., ^ERNO{A, A. in 
FILIPI~, M. Combination of in vitro bioassays for 
the determination of cytotoxic and genotoxic 
potential of wastewater, surface water and 
drinking water samples. Chemosphere, 2009, 
vol. 75, {t. 11, str. 1453–1460.
�3� ISO 5667-16, 1998. Water analysis – 
General Guidance for the Biotesting.
�4� ISO 13829, 2010. Kakovost vode – 
Dolo~evanje genotoksi~nosti vode in odpadne 
vode z umu-preizkusom.
�5� MARON, D. M. in AMES, B. N. Revised 
methods for the Salmonella mutagenicity test. 
Mutation Research, 1983, vol. 113, {t. 3–4, str. 
173–215.
�6� Xenometrix, 2010. Ames MPF™ 98/100 
Aqua Microplate Format Mutagenicity 
Assay for testing of water samples using S. 
typhimurium TA98 and TA100. Instructions 
for use. Version 1.4_S June 2010, Allschwil, 
Switzerland.
�7� MOSMANN, T. Rapid colorimetric assay 
for cellular growth and survival: application 
to proliferation and cytotoxicity assay. Journal 
of Immunologica lMethods, 1983, vol. 65, {t. 
1–2, str. 55–63.
�8� SINGH, N. P ., McCOY , M. T., TICE, R. R. 
in SCHNEIDER, E. L. A simple technique for 
quantitation of low levels of DNA damage 
individual cells. Experimental Cell Research, 
1988, vol. 175, {t. 1, str. 184–191.
�9� ŽEGURA, B. in FILIPI~, M. Application 
of in vitro comet assay for genotoxicity 
testing, Optimization in Drug Discovery: 
In Vitro Methods (Methods in 
PharmacologyandToxicology, YAN, Z. in 
CALDWELL, G. (urednika), str. 301–313.
Slika 1: Vpliv odpadnih in povr{inskih vod papirnice 1 na po{kodbe DNA celic HepG2.
* prikazuje statisti~no zna~ilno pove~anje (test Dunnet, p < 0.01).
Slika 2: Vpliv odpadnih in povr{inskih vod papirnice 2 na po{kodba DNA celic HepG2.
* prikazuje statisti~no zna~ilno pove~anje (test Dunnet, p < 0.01).
TA98 TA100
vzorec
razred~ite 
v
brez metaboli~ne 
aktivacije
z metaboli~no aktivacijo
brez metaboli~ne 
aktivacije
z metaboli~no aktivacijo
pozitivne 
jamice ± SD
FIBa
pozitivne 
jamice ± SD
FIBa
pozitivne 
jamice ± SD
FIBa
pozitivne 
jamice ± SD
FIBa
Papirnica 1
kontrola 0.67±0.58 0.33±0.58 3.0±1.73 1.67±1.15
pred biolo{kim 
~i{~enjem
1:1 1.33±0.58 0.79 2.0±1.0 1 3.67±2.52 0.65 2.33±1.53 0.83
po biolo{kem 
~i{~enju
1:1 0.67±1.15 0.35 2.0±2.65 1 1.33±0.58 0.24 3.33±2.31 1.18
nad iztokom 1:1 0.67±0.58 0.35 1.0±1.0 0.5 1.0±1.0 0.18 2.0±0.0 0.71
pod iztokom 1:1 0.67±4.04 0.26 0.67±0.58 0.33 1.67±0.58 0.30 2.0±1.0 0.71
Papirnica 2
kontrola 0.67±0.58 1.33±2.31 4.0±1.0 1.0±1.0
pred 
anaerobnim 
~i{~enjem
1:1 2.0±2.0 1.61 2.33±0.58 0.53 2.67±2.08 0.53 26.0±6.0 13.5
1:2 - - - - - - 4.67±1.15 2.33
1:4 - - - - - - 0.33±0.58 0.17
po anaerobnem 
~i{~enju
1:1 0.67±0.58 0.54 2.67±0.58 0.40 2.0±1.0 0.40 1.3±1.15 0.67
po aerobnem 
~i{~enju
1:1 0.67±0.58 0.33 2.0±1.0 0.60 3.0±1.0 0.60 1.0±1.0 1.0
nad iztokom 1:1 1.0±1.0 0.50 0.67±0.58 0.60 3.0±1.73 0.60 0.0±0.0 /
pod iztokom 1:1 1.33±1.53 0.67 1.67±2.89 0.73 3.67±1.53 0.73 1.33±2.65 1.33
Tabela 1: Mutagena aktivnost vzorcev odpadnih in povr{inskih vod papirnice 1 in papirnice 2, dolo~ena z Ames MPF 98/100 Aqua™ testom
bakterijski test ne zazna. Zaskrbljujo~e 
pa je, da je bila genotoksi~na aktivnost 
ugotovljena pri vzorcu vode iz vodotoka 
pod izpustom odpadne vode. To kaže, 
da lahko pride do negativnih vplivov na 
vodne organizme.
ZAKLJU^KI
Rezultati na{e raziskave so pokazali, 
da je genotoksi~nost odpadnih vod 
papirne industrije odvisna od surovin, 
ki jih uporablja pri proizvodnji papirnih 
izdelkov, saj je bil neo~i{~en vzorec 
odpadne vode iz papirne industrije, 
ki uporablja celulozna vlakna, 
negenotoksi~en, medtem ko je neo~i{~en 
vzorec odpadne vode iz papirne industrije, 
ki uporablja reciklirana vlakna, povzro~il 
mutacije pri testiranju z Ames MPF 
98/100 Aqua™ testom, kot tudi po{kodbe 
DNA pri testiranju s celicami HepG2. 
Pokazalo se je tudi, da je anaerobno in 
aerobno ~i{~enje odpadne vode papirnice 
2 odstranilo in/ali inaktiviralo bakterijske 
mutagene, ne pa tudi genotoksi~nih 
snovi, ki povzro~ajo po{kodbe DNA pri 
HepG2 celicah. Genotoksi~nost odpadne 
vode, ki se izteka v prejemno vodo, in 
genotoksi~nost prejemne vode kaže, 
da odpadne vode iz papirne industrije, 
ki v proizvodnji uporabljajo reciklirana 
vlakna, predstavljajo nevarnost tako za 
okolje, predvsem za vodne organizme, 
posredno pa tudi za ~loveka. Na osnovi 
Celice HepG2 smo za 24 ur izpostavili 
vodnim razli~nim vzorcem (30% v.v). 
Poskus smo ponovili v 3 neodvisnih 
ponovitvah in v vsakem poskusu 
analizirali 50 jeder. Rezultati so 
podani kot % DNA v repu in prikazani 
kot grafikon kvantilov. Razlike med 
celicami tretiranimi z vzorci in 
kontrolnimi celicami smo analizirali z 
enosmerno analizo variance (ANOVA, 
Kruskal-Wallis). Za primerjavo 
median % DNA v repu smo uporabili 
Dunnetov test.
teh rezultatov ne moremo sklepati, katere 
snovi v odpadni vodi so genotoksi~ne. 
Za identifikacijo teh snovi bi bile 
potrebne kemijske analize oziroma tako 
imenovano z biolo{kim testiranjem 
vodeno frakcioniranje. Podatki o naravi 
genotoksi~nih snovi v odpadni vodi bi 
papirni industriji omogo~ili usmerjen 
razvoj u~inkovitej{ih postopkov za 
odstranjevanje oziroma zmanj{anje 
prisotnosti snovi, ki prispevajo h 
genotoksi~ni aktivnosti odpadnih vod, in/
ali zamenjala proizvodne surovine z okolju 
bolj prijaznimi.
ZAHVALA
Raziskavo delno financira Evropska 
unija, in sicer iz Evropskega socialnega 
sklada. Delno je bila raziskava financirana 
tudi znotraj ARRS programa P1-0245. 
Zahvaljujemo se tudi podjetju Xenometrix 
AG ({vica), ki nam je za to raziskavo 
podarilo Ames MPF 98/100 Aqua™ test 
(http://www.xenometrix.ch).
Do danes se je ohranilo 78 evidentiranih 
primerkov izvirne Dalmatinove Biblije, od 
tega 36 v Sloveniji. Primerek, ki ga hrani 
knjižnica v Kranju, je bil eden izmed huje 
po{kodovanih, zato smo se odlo~ili za 
konservatorsko-restavratorski poseg. 
V okviru raziskav, ki so bile izvedene pred 
in ob konservatorsko-restavratorskem 
posegu je bila opravljena tudi 
karakterizacija papirja, ki sestavlja knjižni 
blok Dalmatinove Biblije iz kranjske 
knjižnice. Cilj raziskave je bila primerjalna 
analiza in opredelitev lastnosti papirja 
kot nosilca tiskane knjige, z namenom 
opredelitve postopkov pri konserviranju 
in restavriranju tiskane in poslikane knjige 
kot dragocenega dokumenta, za hrambo 
za ~im dalj{e obdobje v prihodnosti.
1
In{titut za celulozo in papir
2
Nacionalni in{titut za biologijo, oddelek za genetsko 
toksikologijo in biologijo raka
3
Fakulteta za gradbeni{tvo in geodezijo,
Univerza v Ljubljani
4
Zdravstvena fakulteta, Univerza v Ljubljani