3 farm vestn 2022; 73
UČINKI
SLOVENSKE
TERMALNE
VODE NA KOŽNE
CELICE, GOJENE
IN VITRO
THE INFLUENCE OF
THERMAL WATER FROM
SLOVENIA ON IN VITRO
CULTURED SKIN CELLS
AVTORJI / AUTHORS:
asist. Lidija Gradišnik, mag. soc. gerontol., ing. živ. teh.1, 2
prof. dr. Danica Železnik, prof. zdr. vzg.2, 3
Boštjan Krajnc, mag. farm.1
prof. dr. Uroš Maver, mag. farm.1
Andrej Eržen, univ. dipl. prav.4
Asist. Marko Milojević, mag. lab. biomed.1
prof. dr. Tomaž Velnar, dr. med.5
1 Medicinska fakulteta Maribor, Taborska 8, 2000 Maribor
2 AMEU Maribor, Slovenska 17, 2000 Maribor
3 Visoka šola za zdravstvene vede Slovenj Gradec, 
Glavni trg 1, 2380 Slovenj Gradec 
4 IARMR Terme Dobrna, Dobrna 50, 3204 Dobrna
5 Univerzitetni klinični center Ljubljana, 
Klinika za nevrokirurgijo, Zaloška 7, 1000 Ljubljana
NASLOV ZA DOPISOVANJE / CORRESPONDENCE:
E-mail: tvelnar@hotmail.com
POVZETEK
Termalna voda ima zdravilne učinke na različne ko-
žne bolezni, kot so protibolečinski, protivnetni in re-
generativni učinki. V raziskavi smo testirali učinke
slovenske termalne vode iz Term Dobrna na gojenih
kožnih celicah in vitro, in sicer neobdelano termalno
vodo, z UV-svetlobo sterilizirano termalno vodo, fil-
trirano termalno vodo ter ultračisto vodo in vodo-
vodno vodo kot kontroli. Živost oz. viabilnost celic
v celičnih kulturah smo določali s kolorimetričnim
testom MTT. Termalna voda je rast keratinocitov
statistično značilno najbolj spodbudila pri redčitvah
1 : 8 in 1 : 16. Rast fibroblastov je spodbudila pri
vseh redčitvah (1 : 2, 1 : 4, 1 : 8 in 1 : 16), vendar
učinki niso dosegli meje statistično značilnih vred-
nosti. Pri obeh celičnih kulturah in pri vseh redčitvah
je bil vpliv termalne vode na rast celic in vitro podo-
ben vplivu termalne vode, predhodno sterilizirane z
UV-svetlobo. Ugotovili smo, da ima termalna voda
iz Dobrne koristne učinke na rast in regeneracijo
človeških kožnih celic in vitro, zato menimo, da je
priporočljiva za preventivno in terapevtsko uporabo
pri določenih kožnih boleznih. 
KLJUČNE BESEDE: 
celične kulture, fibroblasti, keratinociti, koža, ter-
malna voda
ABSTRACT
Thermal water exerts healing effects on various
skin diseases such as antinociceptive, anti-inflam-
matory and regenerative effects. The effects of ther-
mal water from Dobrna springs, Slovenia, were
tested in in vitro skin cell models, including un-
treated thermal water, UV-sterilised thermal water,
filtered thermal water, and ultrapure water and tap
water as controls. Cell viability in cell cultures was
determined using the MTT test. Thermal water stim-
ulated the growth of keratinocytes statistically sig-
nificantly, at 1:8 and 1:16 dilutions. At all dilutions
(1:2, 1:4, 1:8 and 1:16), it stimulated the growth of
fibroblasts, however, values were not statistically
significant. In both cell cultures and at all dilutions,
the effects of thermal water and UV-sterilised ther-
mal water on the cell growth were similar. To con-
clude, thermal water from Dobrna has a beneficial
effect on the growth and regeneration of skin cells
IZ
V
IR
N
I Z
N
A
N
S
TV
E
N
I Č
LA
N
K
I
   
pogosto v kombinaciji z morskim zrakom oz. morsko klimo
in soncem, na kožo bolnikov z luskavico, atopijskim der-
matitisom in revmatoidnim artritisom s prizadetostjo kože
ter različnimi vrstami alergij (3–5). 
Pri vnetnih kožnih boleznih, ki kožo okvarijo na mikroskop-
ski in makroskopski ravni, so patogenetski procesi, ki se
izražajo v kožnih plasteh in vplivajo tako na celice kot na
druge organske sisteme, posledica imunskih interakcij, v
katerih sodelujejo keratinociti, celice vezivnega tkiva (fibro-
blasti), celice prirojene in pridobljene imunosti ter številni
topni mediatorji (3, 6). Za blaženje in zdravljenje tovrstnih
bolezni pogosto uporabljamo balneoterapijo oz. kopanje v
termalni izvirski ali morski vodi, kar kombiniramo z ustrez-
nimi zdravili in drugimi vrstami naravnih snovi (7). 
Mehanizem delovanja mineralne in morske vode na kožne
celice je podoben, a specifičen, glede na sestavo topljen-
cev, hitrost učinkovanja, indikacije za zdravljenje in tera-
pevtske učinke. Pri tovrstnem zdravljenju prevladujejo lo-
kalni učinki številnih ionov, npr. natrijevih in kloridnih (4).
Voda in ioni, ki pridejo v stik z vrhnjimi plastmi kože, prodi-
rajo skoznje in nato v kožnih celicah spremenijo osmozni
tlak, preko celičnih membranskih ionskih kanalčkov pa sti-
mulirajo živčne receptorje. Zdravilno delovanje mineralnih
vod je torej posledica mehanizma, ki ga pogojujeta kon-
centracija in vrsta soli, ki jih vsebujejo. V kožnih celicah se
s pomočjo celične osmoze sproži bodisi aktivacija ali zavi-
ranje celičnih apoptoznih ali nekroznih procesov. Osmozni
mehanizem nato vpliva tudi na mehansko občutljive celične
transmembranske kanalčke oz. proteine, ki so vključeni v
proces signalizacije. V osnovi gre torej predvsem za učinke
adsorpcije/absorpcije in penetracije v mineralnih vodah
raztopljenih ionov skozi kožo (8).
Proliferacija in migracija keratinocitov in fibroblastov sta bi-
stveni za popravilo in obnovo kožne bariere po različnih
poškodbah kože (8, 9). Termalne vode, ki vsebujejo številne
različne soli in elemente v sledovih, kot sta npr. bor in man-
gan (v nekaterih termalnih izvirih sta prisotna v visokih kon-
centracijah), lahko pripomorejo k boljšemu in hitrejšemu
celjenju ran (9). Z uporabo celičnih modelov in vitro so
ugotovili, da imata omenjena mikroelementa pozitivne
učinke na kulturo človeških keratinocitov (8). Opazili so na-
mreč, da je že po 24-urni inkubaciji kulture keratinocitov v
mediju z dodatkom termalne vode, ki je vsebovala borove
soli v koncentracijah od 0,5 µg/ml do 10 µg/ml in manga-
nove soli v koncentracijah od 0,1 µg/ml do 1,5 µg/ml,
prišlo do pospešenega zapiranja oz. preraščanja mehansko
povzročene vrzeli (rane) v primerjavi s kontrolno kulturo,
kjer je bil prisoten le gojitveni medij. Pri tem pa zaprtje
vrzeli oz. rane ni bilo posledica pospešene celične prolife-
1Uvod
S staranjem se spreminjajo vsi organski sistemi v telesu,
tudi koža, vendar zelo različno (1). Človeški organizem ima
različne obrambne in reparativne mehanizme, s katerimi
ščiti in obnavlja kožo. Epitelijske kožne celice oz. keratinociti
se hitro delijo, rastejo in odpadajo s poroženelih povrhnjih
plasti, s čimer se koža obnavlja. Obstajajo pa tudi različni
načini, s katerimi lahko vplivamo na zdravje kože od zunaj
in jih uporabljamo v preventivne in kurativne namene. Znano
je, da ima termalna voda blagodejne učinke na kožo pri
različnih kožnih boleznih, kot so alergije, luskavica in der-
matitis (2, 3). 
Zgodovinsko gledano ima voda v medicini zelo pomembno
vlogo. Tudi danes je glavna komponenta različnih vrst zdra-
vljenj, ki jih imenujemo spa terapije. Ime izhaja iz latinskega
jezika in pomeni zdravje skozi vodo (sanus per aquam).
Pri spa terapijah uporabljamo vodo enteralno kot vehikel
za trdne komponente z zdravilnim učinkom ali pa dermalno
v obliki kopeli v vodi z zdravilnimi učinki, kar imenujemo
balneoterapija (3, 4). To je starodavna metoda, namenjena
preventivi, zdravljenju in rehabilitaciji, saj ima dokazane bla-
godejne učinke na človeško telo (2, 5). Tako naj bi tovrstna
voda po stiku z obolelo kožo omogočila njeno regeneracijo
in izboljšano zaščitno funkcijo ter delovala protibolečinsko
in protivnetno (3, 4).
2Pregled dosedanjihraziskav
Kljub široki terapevtski uporabi termalnih vod je na voljo le
malo raziskav, ki bi proučevale njihove pozitivne učinke in
mehanizme delovanja na celičnih modelih in vitro (2, 4).
Objavljena so poročila, ki potrjujejo ugodne učinke mine-
ralne sladke in morske vode, pa tudi različnih vrst blata,
in vitro. It can therefore be recommended for pre-
ventive and therapeutic use for various skin dis-
eases.
KEY WORDS: 
cell cluture, fibroblasts, keratinocytes, skin, thermal
water
4
U
Č
IN
K
I S
LO
V
E
N
S
K
E
 T
E
R
M
A
LN
E
 V
O
D
E
 N
A
 K
O
Ž
N
E
 C
E
LI
C
E
, G
O
JE
N
E
 IN
 V
IT
R
O
farm vestn 2022; 73
racije. Opažene učinke hitrejšega preraščanja namerno
povzročene vrzeli v kulturi keratinocitov so zato pripisali
delovanju bora in mangana, ki ugodno vplivata na celjenje
ran tako, da pospešita migracijo kožnih epitelijskih celic, ki
rano zato hitreje epitelizirajo in zaprejo (8, 9). Proučevali so
tudi vplive drugih ionov, kot so kalcijevi, cinkovi in manga-
novi (10, 11). Ti spodbujajo proliferacijo in diferenciacijo
keratinocitov ter modulirajo izražanje njihovih integrinskih
receptorjev. To so transmembranski proteini, ki so povezani
s celičnim citoskeletom. Vključeni so v procese celičnega
signaliziranja in omogočajo pritrjevanje celic ter njihovo po-
vezovanje z zunajceličnim ogrodjem. Prisotnost integrinov
omogoča hiter, spremenljiv in prilagodljiv odziv celice na
površinske dražljaje, kar je ključno za celično migracijo in
adhezijo v procesih obnove kože in celjenja ran (11–13). 
O ugodnem delovanju mineralne termalne izvirske vode na
človeške keratinocite, gojene in vitro, so poročali tudi Tac-
heau in sod. (14). Pokazali so, da se je povečalo izražanje
genov, povezanih s homeostazo kože. Pomembne spre-
membe so tako opazili na nivoju uravnavanja epidermalne
kohezije in medcelične komunikacije, v bolj uravnoteženi
celični proliferaciji, v učinkovitejših mehanizmih popravljanja
napak dednega zapisa ter v večjem obsegu izražanja an-
tioksidantov in posledični odpornosti na oksidativni stres
(14, 15). Na celičnem in subceličnem nivoju mineralne vode
spodbujajo izražanje genov, ki so vključeni v zaščito celic,
delovanje celičnega cikla, dolgoživost in uravnavanje hidra-
cije človeških keratinocitov (16). Rezultati raziskav kažejo
tudi na to, da lahko termalno vodo uporabljamo kot po-
membno sestavino za zmanjševanje ali zaviranje nekaterih
škodljivih učinkov, ki povzročajo staranje kože (14, 17–19). 
Mineralne vode poleg pospeševanja proliferacije in dife-
renciacije keratinocitov ugodno učinkujejo tudi na fibrobla-
ste, pri čemer različno delujejo na različno zrele celice (20).
Ugotovili so, da je dodatek mineralne vode v celično kulturo
izzval predvsem množenje mladih, nekoliko manj pa po-
večal proliferacijo starih fibroblastov (20, 21). Povečanje
celične proliferacije so pripisali prisotnosti kalcija in ma-
gnezija v testiranih vzorcih vode, saj spodbujata prolifera-
tivno aktivnost celic preko aktivacije transmembranskih re-
ceptorjev, prenosa znotrajceličnih in medceličnih signalov
ter povečanja učinkov topnih rastnih dejavnikov. Za obnovo
kože, predvsem po poškodbah, so pomembni predvsem
mladi fibroblasti, ki se lahko razrastejo v dermisu (20–22).
Mineralne in termalne vode ne učinkujejo ugodno le na
kožne, ampak tudi na druge vrste celic, še posebej na
vnetne, endotelijske in celo celice respiratornega trakta (7,
16). Termalne vode lahko tako uporabljamo za spodbujanje
oz. vzdrževanje zdravja, preprečevanje in zdravljenje ne-
katerih vnetnih in degenerativnih bolezni kože in sklepov,
pri metabolnih boleznih, boleznih ožilja, dihal ter pri reha-
bilitaciji (23–25). Vse pogosteje jih vgrajujejo tudi v kozme-
tične izdelke (2, 24).
Namen naše raziskave je bil proučiti delovanje termalne
vode iz Term Dobrna na kulture kožnih celic in vitro, saj
njenih učinkov na človeške keratinocite in kožne fibroblaste
do sedaj še niso raziskali. Predpostavili smo, da ima ta
termalna voda ugoden učinek na rast obeh vrst celic v ce-
ličnih kulturah.
3Materiali in Metode 
Raziskavo smo izvedli v skladu z uveljavljenimi etičnimi na-
čeli, ki veljajo pri delu s celičnimi kulturami. Eksperimentalni
del raziskave je potekal na Medicinski fakulteti v Mariboru,
v laboratoriju za delo s celičnimi kulturami Inštituta za bio-
medicinske vede.
3.1 GOJENJE KERATINOCITOV 
IN FIBROBLASTOV
Celice celičnih linij človeških keratinocitov HaCaT (kerati-
nociti) in kožnih fibroblastov Detroit 551 (ATCC CCL-110),
smo kupili pri organizaciji ATCC (American Type Culture
Collection, ZDA). Celične kulture smo vzpostavili in jih
vzdrževali po priporočilih ATCC. Keratinocite HaCaT smo
gojili v mediju Advanced DMEM/F12 (Gibco, Thermo Fisher
Scientific, ZDA) s 5 % FBS (serum govejega zarodka;
Thermo Fisher Scientific, ZDA), 100 E/ml penicilina (Merck,
Nemčija), 0,1 mg/mL streptomicina (Merck, Nemčija) in 
2 mM L-glutamina (Merck, Nemčija), fibroblaste pa v mediju
Advanced DMEM (Gibco, Thermo Fisher Scientific, ZDA) s
5 % FBS (Thermo Fisher Scientific, ZDA), 100 E/ml penici-
lina (Merck, Nemčija), 0,1 mg/mL streptomicina (Merck,
Nemčija) in 2 mM L-glutamina (Merck, Nemčija). 
3.2 TESTNI IN KONTROLNI VZORCI VOD
Preiskovali smo termalno vodo iz izvira v Termah Dobrna,
kjer smo jo odvzeli v sterilno 500-mililitrsko steklenico in jo
takoj prenesli v celični laboratorij. Testirali smo naslednje
vzorce: I) naravno termalno vodo, II) termalno vodo, ki smo
jo predhodno 30 minut sterilizirali z UV-svetlobo, in III) ter-
malno vodo, ki smo jo sterilizirali s filtracijo skozi filter z ve-
5 farm vestn 2022; 73
IZ
V
IR
N
I Z
N
A
N
S
TV
E
N
I Č
LA
N
K
I
likostjo por 0,22 µm (MF-Millipore, Merck, Nemčija). Za
kontrolna vzorca smo uporabili z aparatom Milliq (Millipore,
Merck, Nemčija) prečiščeno vodo (ultračisto vodo) in vo-
dovodno vodo. Vse omenjene vzorce smo razredčili v raz-
merjih 1 : 2, 1 : 4, 1 : 8 in 1 : 16 v ustreznem mediju, ki
smo ga uporabili za gojenje posamezne vrste celic. 
3.3 VZPOSTAVITEV CELIČNIH KULTUR
IN UGOTAVLJANJE ŽIVOSTI
GOJENIH CELIC
Keratinocite in kožne fibroblaste smo naselili na mikrotitrsko
ploščico P96 (Falcon, Merck, Nemčija), in sicer po 10.000
celic na vdolbinico. Po 24 urah inkubacije v inkubatorju pri
37 °C, 5 % CO2 v zraku ter 95-odstotni vlagi smo v kva-
druplikatih k obema vrstama celic dodali različne redčitve
posameznega vzorca termalne in kontrolnih vod. Dodatno
(pozitivno) kontrolo so predstavljali keratinociti in fibroblasti,
ki smo jih gojili izključno v prisotnosti ustreznega medija.
Živost kožnih celic v kulturah smo nato po dodatnih 24
urah inkubacije določali s kolorimetričnim testom MTT (3-
(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolijev bromid) (Sigma-
Aldrich, Merck, Nemčija). Žive celice s pomočjo mitohon-
drijskega NADPH reducirajo tetrazolijevo sol v
modro-vijolično obarvan formazan, katerega intenziteto, ki
je sorazmerna količini metabolno aktivnih celic, izmerimo
s spektrofotometrom pri valovni dolžini 570 nm. Meritve
smo opravili s pomočjo spektrofotometra Varioskan Flash
(Thermo Fisher Scientific, ZDA) in izračunali in podali re-
zultate živosti celic relativno na kontrolne celice, ki so bile
gojene samo v ustreznem celičnem mediju.  
Z invertnim optičnim mikroskopom Axiovert 40 (Zeiss,
Nemčija) smo spremljali učinke dodatkov različnih vzorcev
in koncentracij termalnih in kontrolnih vod na morfologijo
celic v kulturah, posneli mikrofotografije z digitalno kamero
Axiocam (Zeiss, Nemčija) ter rezultate kvalitativno ovrednotili
in jih primerjali z izsledki meritev testa MTT.
3.4 STATISTIČNA ANALIZA
Vse numerične vrednosti so podane kot aritmetična srednja
vrednost ± standardni odklon. Normalno porazdelitev po-
datkov smo preverili z uporabo testa Shapiro-Wilk, na pod-
lagi testa Lavene pa smo ocenili enakost varianc med sku-
pinami. Na podlagi tega smo opravili enosmerno analizo
variance (ANOVA), ki ji je sledil post-hoc test Bonferroni. P-
vrednosti, manjše kot 0,05 (p < 0,05), smo obravnavali kot
statistično značilne. Statistično analizo podatkov smo opra-
vili s programsko opremo SPSS Statistics 25 (IBM Corp.
Armonk, NY, USA). Za izris grafov smo uporabili programsko
opremo Excel (Microsoft Corp. Redmon, WA, USA). 
4rezUltati 
4.1 VPLIV TERMALNE VODE NA ŽIVOST
GOJENIH KERATINOCITOV
Rast keratinocitov je naravna termalna voda v mediju Ad-
vanced DMEM/F12 statistično značilno najbolj spodbudila
pri redčitvi 1 : 16, nekoliko manj (vendar še vedno stastistično
značilno bolj kot v primerjavi s kontrolnimi celicami) pa pri
redčitvah 1 : 8 in 1 : 4. Od treh testiranih vzorcev termalnih
vod (naravna, sterilizirana z UV-svetlobo in sterilizirana s fil-
tracijo) sta imeli na rast keratinocitov intaktna naravna ter-
malna voda in voda, sterilizirana z UV-svetlobo, pri redčitvah
1 : 16 in 1 : 8 statistično značilno najboljši učinek med vsemi
testiranimi vzorci. To kaže tudi na dejstvo, da sterilizacija z
UV-svetlobo ne vpliva na pozitivne učinke termalnih vod.
Rezultati nakazujejo, da je filtracija manj primerna metoda
za sterilizacijo termalnih vod, saj pri redčitvah 1 : 4, 1 : 8 in
1 : 16 filtrirana termalna voda ni izkazovala statistično zna-
čilno boljšega vpliva na rast keratinocitov v primerjavi s kon-
trolo. Vodovodna voda je ne glede na redčitev statistično
značilno negativno vplivala na živost keratinocitov, medtem
ko ultračista voda ni imela značilnega vpliva na živost celic
pri redčitvah 1 : 4, 1 : 8 in 1 : 16. Vse vode so značilno
znižale rast celic pri redčitvi 1 : 2, kar je najverjetneje posle-
dica prevelike redčitve rastnega medija. Analiza vpliva ter-
malnih vod na živost keratinocitov je prikazana na sliki 1.
4.2 VPLIV TERMALNE VODE NA ŽIVOST
GOJENIH KOŽNIH FIBROBLASTOV
Čeprav rezultati niso dosegli statistično značilne vrednosti,
zaznan pozitiven trend nakazuje, da naravna termalna voda
in termalna voda, sterilizirana z UV-svetlobo, spodbujata
rast fibroblastov. Rezultati, pridobljeni na kožnih fibroblastih,
se skladajo z rezultati, pridobljenimi na keratinocitih. Za
manj primerno metodo sterilizacije se je ponovno izkazala
filtracija termalne vode. Tudi vodovodna voda je negativno
vplivala na rast kožnih fibroblastov ne glede na redčitev.
Vse vode, razen naravne in z UV-svetlobo sterilizirane ter-
6
U
Č
IN
K
I S
LO
V
E
N
S
K
E
 T
E
R
M
A
LN
E
 V
O
D
E
 N
A
 K
O
Ž
N
E
 C
E
LI
C
E
, G
O
JE
N
E
 IN
 V
IT
R
O
farm vestn 2022; 73
malne vode, so zavrle rast kožnih fibroblastov pri redčitvi 
1 : 2, vendar je bil učinek manjši kot pri keratinocitih. Prav
tako so na kožnih fibroblastih manj izraziti pozitivni učinki
termalnih vod, kar kaže na dejstvo, da je ta celična kultura
manj občutljiva na dodatek termalnih vod celičnemu mediju.
Analiza vpliva termalnih vod na živost kožnih fibroblastov
je prikazana na sliki 2.   
4.3 MORFOLOŠKE ZNAČILNOSTI
KERATINOCITOV IN KOŽNIH
FIBROBLASTOV V CELIČNIH
KULTURAH 
Z invertnim optičnim mikroskopom smo pri 50-kratni po-
večavi opazovali in posneli keratinocite in kožne fibroblaste
po 24-urni inkubaciji s preiskovanimi vzorci vod, ki so bili
dodani celičnim kulturam v redčitvi 1 : 16 v ustreznem me-
diju za gojenje posamezne vrste celic (sliki 3 in 4).
Na mikrofotografijah vidimo, da je bila kultura človeške ke-
ratinocitne linije HACAT v vdolbinici mikrotitrske plošče po
dodatku neobdelane naravne termalne vode v redčitvi 
1 : 16 (slika 3D) po 24 urah inkubacije povsem konfluentna
(preraščena). Rast celic je bila torej boljša kot pri pozitivni
kontroli, kjer so celice rasle samo v gojitvenem mediju
(slika 3A). Tudi dodatek vzorcev termalne vode, predhodno
sterilizirane z UV-svetlobo (slika 3E) in sterilizirane s filtracijo
(slika 3F), v redčitvi 1 : 16 v gojitvenem mediju, je spodbujal
rast keratinocitov v večji meri kot sam medij (pozitivna kon-
trola). Nasprotno pa je bila rast celic HaCaT po dodatku
ultračiste vode (slika 3B) in vodovodne vode (slika 3C) v
redčitvi 1 : 16 slabša kot v kontrolni kulturi (slika 3A).
7 farm vestn 2022; 73
IZ
V
IR
N
I Z
N
A
N
S
TV
E
N
I Č
LA
N
K
I
Slika 1: Rezultati testa MTT v keratinocitnih kulturah. Prikazane so povprečne vrednosti štirih meritev za vsak vzorec in kontrolo, s
pripadajočimi standardnimi odkloni. Živost keratinocitov je podana relativno na kontrolne celice keratinocitov (rdeča črta s pripadajočimi
standardnimi odkloni), ki so bile gojene samo v rastnem mediju Advanced DMEM/F12. Zvezdica označuje vzorce, kjer je bila celična živost
bodisi statistično značilno (p < 0.05) višja oziroma nižja v primerjavi s kontrolnimi celicami.
Figure 1: MTT test results in keratinocyte cell cultures. The mean values of the four measurements for each sample and the control are
shown with the corresponding standard deviations. Keratinocyte viability was given relative to the keratinocyte control cells (the red line with
the corresponding standard deviations) grown only in the Advanced DMEM/F12 medium. Asterisk indicates samples in which cell viability
was either significantly (p < 0.05) higher or lower than that of the control cells.
Izsledki, ki smo jih razbrali iz mikrofotografij kultur kožnih
fibroblastov celične linije Detroit 551, so sovpadali z rezultati
meritev živosti celic. Po dodatku neobdelane naravne ter-
malne vode v redčitvi 1 : 16 v gojitvenem mediju so celice
v kulturi po 24 urah inkubacije dosegle 100-odstotno konf-
luenco (slika 4D), kar je bil boljši rezultat od tistega, ki smo
ga opazili pri pozitivni kontroli, kjer smo fibroblaste gojili iz-
ključno v mediju (slika 4A). Dodatek ultračiste vode v redčitvi
1 : 16 (slika 4B) je izzval celično rast, ki je bila primerljiva s
pozitivno kontrolo (slika 4B). Nekoliko slabšo rast fibrobla-
stov kot v pozitivni kontroli smo opazili po dodatku termalne
vode v redčitvi 1 : 16, ki smo jo predhodno sterilizirali z
UV-svetlobo (slika 4E). Dodatka vodovodne vode (slika 4C)
in filtrirane termalne vode (slika 4F) v redčitvi 1 : 16 v gojit-
venem mediju sta celično rast v primerjavi s pozitivno kon-
trolo (slika 4A) zmanjšala.
4.4 POVZETEK EKSPERIMENTALNIH
REZULTATOV
Z merjenjem živosti gojenih keratinocitov in kožnih fibro-
blastov s testom MTT smo pokazali, da ima termalna voda
iz Term Dobrna statistično značilno pozitiven učinek na
rast keratinocitov in kožnih fibroblastov in vitro. Ugotovili
smo, da sta imeli intaktna naravna termalna voda in voda,
sterilizirana z UV-svetlobo, statistično značilno največji po-
zitiven učinek na rast obeh vrst kožnih celic glede na ustre-
zno kontrolo, pri čemer je bil učinek odvisen od koncen-
tracije vode v gojitvenem mediju in od vrste celic.
Rast keratinocitov v kulturi je intaktna termalna voda, ki
smo jo dodali gojitvenemu mediju, statistično značilno naj-
bolj spodbudila pri redčitvah 1 : 8 in 1 : 16, nekoliko manj,
vendar še vedno statistično značilno, pa pri redčitvi 1 : 4 v
8
U
Č
IN
K
I S
LO
V
E
N
S
K
E
 T
E
R
M
A
LN
E
 V
O
D
E
 N
A
 K
O
Ž
N
E
 C
E
LI
C
E
, G
O
JE
N
E
 IN
 V
IT
R
O
farm vestn 2022; 73
Slika 2: Rezultati testa MTT v kulturah kožnih fibroblastov. Prikazane so povprečne vrednosti štirih meritev za vsak vzorec in kontrolo, s
pripadajočimi standardinimi odkloni. Živost kožnih fibroblastov je podana relativno na kontrolne celice kožnih fibroblastov (rdeča črta s
pripadajočimi standardnimi odkloni), ki so bile gojene samo v rastnem mediju Advanced DMEM. Zvezdica označuje vzorce, kjer je bila celična
živost bodisi statistično značilno (p < 0.05) višja oziroma nižja v primerjavi s kontrolnimi celicami.
Figure 2: MTT test results in skin fibroblast cultures. The mean values of the four measurements for each sample and the control are shown
with the corresponding standard deviations. The viability of skin fibroblasts is given relative to the skin fibroblast control cells (the red line with
the corresponding standard deviations) grown only in the Advanced DMEM growth medium. Asterisk indicates samples where cell viability
was either significantly (p < 0.05) higher or lower compared to the control cells.
primerjavi s kontrolnimi celicami, gojenimi samo v ustrez-
nem rastnem mediju. V kulturah kožnih fibroblastov je imela
največji spodbujevalni učinek na celično rast, glede na
kontrolne fibroblaste, redčitev naravne termalne vode v
gojitvenem mediju v razmerju 1 : 16, vendar rezultat ni do-
segel stastistično značilne vrednosti. Tudi pri ostalih red-
čitvah (1 : 2, 1 : 4 in 1 : 8) je zaznaven trend pozitivnega
vpliva intaktne termalne vode na rast fibroblastov, vendar
rezultati niso presegli meje statistične značilnosti v primerjavi
s kontrolnimi celicami, gojenimi v ustreznem mediju brez
dodatka vod. 
Vzorec termalne vode, ki smo ga predhodno sterilizirali z
UV-svetlobo, je izkazoval statistično značilne pozitivne
učinke na rast keratinocitov, medtem ko trend pozitivnega
učinka na živost kožnih fibroblastov ni dosegel meje stati-
stične značilnosti. Med vzorcema naravne termalne vode
in vode, obdelane z UV-svetlobo, glede na redčitev in vrsto
celic ni bilo značilnih razlik. Oba vzorca sta na živost celic
najbolje vplivala pri večjih redčitvah (1 : 4, 1 : 8 in 1 : 16).
Za manj primernega se je izkazal vzorec termalne vode, ki
je bil filtriran skozi filter z velikostjo por 0,22 µm, saj je zna-
čilno negativno vplival na rast kožnih fibroblastov pri vseh
redčitvah. Statistična primerjava obeh obdelanih vzorcev
vode je pokazala, da je bila rast keratinocitov in kožnih fi-
broblastov značilno boljša po dodatku termalne vode, ob-
sevane z UV-svetlobo. Vodovodna voda je značilno nega-
tivno vplivala na živost obeh celičnih kultur ne glede na
redčitev. Ultračista voda ni izkazovala značilnega vpliva na
rast keratinocitov in fibroblastov v primerjavi s kontrolnimi
celicami, razen pri redčitvi 1 : 2. Rast obeh vrst celic je bila
9 farm vestn 2022; 73
IZ
V
IR
N
I Z
N
A
N
S
TV
E
N
I Č
LA
N
K
I
Slika 3: Digitalne mikrofotografije kultur kožnih keratinocitov HaCaT
po 24-urni inkubaciji z različnimi vzorci vod, dodanih k mediju v
redčitvi 1 : 16; invertni optični mikroskop Axiovert 40 Zeiss,
opremljen z digitalno kamero Axiocam Zeiss. Vse slike so bile
posnete pri 50-kratni povečavi.
Figure 3: Micrographs of the HaCaT skin keratinocyte cultures after
24 hours of incubation with various water samples added to the
medium at a dilution of 1:16; Axiovert 40 Zeiss invert optical
microscope equipped with the Axiocam Zeiss digital camera. All
images were taken at a 50x magnification. 
Slika 4: Digitalne mikrofotografije kultur kožnih fibroblastov po 24-
urni inkubaciji z različnimi vzorci vod, dodanih k mediju v redčitvi 1 :
16; invertni optični mikroskop Axiovert 40 Zeiss, opremljen z
digitalno kamero Axiocam Zeiss: Vse slike so bile posnete pri 50-
kratni povečavi.
Figure 4: The micrographs of the skin fibroblast cultures after 24-
hours of incubation with various water samples added to the
medium at a dilution of 1:16; Axiovert 40 Zeiss invert optical
microscope equipped with the Axiocam Zeiss digital camera. All
images were taken at a 50x magnification. 
tako v prisotnosti ultračiste vode in vodovodne vode slabša
v primerjavi z dodatkom naravne in z UV-svetlobo sterilizi-
rane termalne vode. Značilnih razlik med filtrirano termalno
vodo in ultračisto vodo pri keratinocitih ni bilo, medtem ko
je imela filtrirana termalna voda značilno slabši vpliv na rast
kožnih fibroblastov kot ultračista voda.
5razPrava 
Zaradi številnih blagodejnih učinkov na organizem je voda
že od nekdaj neločljivo povezana s človekovim življenjem
(3). S številnimi raziskavami so potrdili koristne učinke ra-
zličnih mineralnih in termalnih vod na izboljšanje delovanja
posameznih organskih sistemov pri ljudeh (16, 26). Med
objavljenimi rezultati raziskav pa je takih, ki bi vsebovali
podatke o neposrednem delovanju termalnih in mineralnih
vod na celične modele in vitro, razmeroma malo, in to kljub
dejstvu, da so zdraviliške vode zelo pomembne za zravlje-
nje različnih kožnih bolezni (2, 4). Predpostavili smo, da
ima termalna voda iz Term Dobrna ugoden učinek na rast
celic človeških celičnih linij HaCaT (keratinociti) in Detroit
551 (dermalni fibroblasti), gojenih in vitro, s čimer bi potrdili
njene ugodne vplive na regeneracijo kože in podprli pripo-
ročila za njeno uporabo pri podpornem zdravljenju kožnih
bolezni (14–16). Poleg tega pa je izraba koristnih učinkov
posameznih zdraviliških mineralnih in termalnih vod eden
od načinov, s katerimi lahko ugodno vplivamo na zaviranje
starostnih sprememb v koži, ki so poleg samega procesa
staranja organizma tudi posledica številnih škodljivih vlivov
okolja in sprememb oz. okvar genetskega materiala v kož-
nih celicah (27–29). 
5.1 IZBIRA TERMALNE VODE ZA
TESTIRANJE 
Termalnih izvirov je na geografskem območju Slovenije ve-
liko, vode iz njih pa se med seboj razlikujejo glede na svoje
značilnosti (30). Te so odvisne od zemeljskih plasti, kjer se
voda nahaja, njihove globine in sestave. Pomembni dejav-
niki, ki vplivajo na lastnosti tovrstnih vod, so temperatura
in vrste raztopljenih snovi, ki opredeljujejo njihove fizikalne
in kemijske značilnosti (16, 31). Termalno vodo iz Term
 Dobrna smo izbrali iz več razlogov, med katerimi je najpo-
membnejši ta, da ima specifično sestavo. Je alkalna in vse-
buje primerne količine kalcija, magnezija in hidrogenkarbo-
nata. Deluje protivnetno ter proti alergijam (30, 31). Glede
na to, da jo uporabljamo v balneoterapiji, se nam je zdelo
smiselno proučiti njeno delovanje na epidermalne in der-
malne kožne celice. Poleg tega so Terme Dobrna najstarejše
zdravilišče na Slovenskem, kjer do sedaj še ni bilo opravljenih
nobenih raziskav termalne vode v pogojih in vitro na način,
kot smo ga načrtovali (30). V prihodnostibi bilo smiselno ra-
ziskati tudi ostale termalne vode v naši državi in rezultate
primerjati med seboj. 
5.2 UPORABA FUNKCIONALNIH KULTUR
ČLOVEŠKIH KERATINOCITOV IN KOŽNIH
FIBROBLASTOV ZA PROUČEVANJE
UČINKOV TERMALNE VODE IN VITRO
Celične kulture smo izbrali skladno z naravo načrtovanih
eksperimentov in fiziološkim pomenom uporabljenih kožnih
celic. Za testiranje smo pripravili štiri zaporedne dvakratne
razredčitve vzorcev izbranih vod, ki smo jih nato dodajali
ustreznemu gojitvenemu mediju, ki je nujno potreben za
normalno rast celic v kulturi. Redčitve vzorcev testiranih
vod smo pripravili tako, da smo jih dodajali ustreznemu
mediju za gojenje celic v naslednjih razmerjih: 1 : 2, 1 : 4,
1 : 8 in 1 : 16. Opažena slabša rast obeh vrst kožnih celic
pri visokih začetnih koncentracijah testiranih vzorcev vod
je bila najverjetneje posledica pomanjkanja potrebnih hra-
nilnih substanc zaradi manjšega deleža gojitvenega medija
v kulturah ter vplivov neustrezne osmolarnosti. 
Z določanjem živosti celic, gojenih v prisotnosti in odsot-
nosti različnih koncentracij testiranih vzorcev vod, smo po-
trdili naše raziskovalne hipoteze, kjer smo predpostavili,
da ima termalna voda ugoden učinek na rast obeh izbranih
vrst kožnih celic. Termalna voda iz Term Dobrna je značilno
pospešila rast keratinocitov in pozitivno vplivala na viabilnost
kožnih fibroblastov v kulturah, pri čemer je bil ta učinek
koncentracijsko odvisen. Tudi izsledki drugih raziskav po-
trjujejo, da termalne vode različno učinkujejo na različne
vrste celic, kar je najverjetneje posledica občutljivosti po-
sameznih celičnih vrst in njihovih osnovnih fizioloških zna-
čilnosti (14, 16, 32). Keratinociti in fibroblasti potrebujejo
za rast v kulturah in vitro poleg hranil tudi določene mi-
kroelemente, katerih koncentracija se ob dodatku termalnih
vod v gojitveni medij zviša (9, 10, 11). Mehanizmi pozitivnih
učinkov termalnih vod na celice so kompleksni in potekajo
preko spreminjanja transmembranske propustnosti, urav-
navanja delovanja celičnih kanalčkov in signalnih molekul
ter vplivov na celični cikel z izražanjem genov, ki so vključeni
v zaščito in dolgoživost celic (8, 12, 16).
10
U
Č
IN
K
I S
LO
V
E
N
S
K
E
 T
E
R
M
A
LN
E
 V
O
D
E
 N
A
 K
O
Ž
N
E
 C
E
LI
C
E
, G
O
JE
N
E
 IN
 V
IT
R
O
farm vestn 2022; 73
Zanimiva je bila tudi ugotovitev, da je od vseh testiranih
vzorcev vod na gojene kožne celice najbolje delovala nara-
vna, neobdelana termalna voda. Statistično značilno pri-
merljiv učinek izkazuje tudi voda, predhodno sterilizirana z
UV-svetlobo, medtem ko voda, filtrirana skozi 0,22 µm mi-
krobiološki filter, na celično rast ni imela dobrega učinka.
Uporaba termalne vode, obsevane z UV-svetlobo, je za
rast keratinocitov in fibroblastov značilno boljša kot dodatek
filtrirane termalne vode, pri čemer je bila ta razlika največja
pri največji redčitvi 1 : 16. Tudi vzorca vodovodne in ultrači-
ste vode, v primerjavi z neobdelano in obdelano (sterilizirano
z UV-svetlobo) termalno vodo, nista pokazala tako ugod-
nega učinka na rast celic. Sestavo vode lahko namreč spre-
menimo z različnimi kemijskimi in fizikalnimi postopki (2).
Na ta način vplivamo tudi na vsebnost snovi, kot so različni
ioni, ki jih celice potrebujejo za normalne fiziološke procese,
to pa se negativno odraža tudi v celičnih kulturah in vitro (9,
20). Podobno je tudi v pogojih in vivo, kjer se koža ob po-
vršinski uporabi neobdelane termalne vode hitreje obnavlja,
tudi celjenje ran je boljše, poleg tega pa se opazno upo-
časnijo procesi staranja v povezavi z genskimi okvarami in
različnimi bolezenskimi spremembami (7, 33). Makroskop-
sko je to vidno kot zmanjševanje ali zaviranje določenih zu-
nanjih škodljivih učinkov na kožo, hitrejše celjenje ran in
ugodni kozmetični učinki (12, 13, 20, 22). Glede na rezultate
naših eksperimentov lahko zaključimo podobno: delovanje
termalne vode iz Term Dobrna na keratinocite in kožne fi-
broblaste, gojene in vitro, je bilo pozitivno, saj je ta pospešila
njihovo rast pri vseh testiranih redčitvah, še posebej pa pri
največji (1 : 16). Vpliv termalne vode je na živost in rast ke-
ratinocitov statitistično značilno pozitiven, medtem ko opa-
žen pozitiven trend ni dosegel statistično značilne vrednosti
pri kožnih fibroblastih. Z izsledki naše raziskave se tako pri-
družujemo ugotovitvam do sedaj sicer redkih raziskav, ki
so v celičnih kulturah in vivo podobno potrdili ugodne učinke
različnih termalnih vod (23, 24). 
Uporaba celičnih kultur v laboratorijskih pogojih je eden iz-
med najuporabnejših, najzanesljivejših in ekonomičnih na-
činov testiranja različnih snovi in vitro (34, 35). Celične
kulture, ki smo jih vzpostavili, so dobro uspevale, poleg
tega pa smo z njihovo uporabo nadzorovali eksperimen-
talne pogoje. Pri nadaljnjih raziskavah in vitro na področju
uporabnosti termalnih vod bi lahko uporabili tudi druge
vrste celic ali tkiv, različne vrste celičnih modelov, drugačne
eksperimentalne pogoje in dodajanje znanih rastnih dejav-
nikov. Poleg tega pa bi lahko v prihodnje na gojenih celicah
primerjalno preizkusili učinke delovanja različnih termalnih
in mineralnih vod, morske vode in tudi vodnih ekstraktov
zdravilnega blata. 
6skleP
V raziskavi smo potrdili, da je delovanje termalne vode iz
Term Dobrna na keratinocite in kožne fibroblaste v pogojih
in vitro ugodno, saj pospešuje rast obeh vrst celic. Na os-
novi teh ugotovitev sklepamo, da ima pozitiven učinek na
rast in regeneracijo poglavitnih tipov kožnih celic, zato me-
nimo, da je njena uporaba priporočljiva tudi za preventivno
in terapevtsko uporabo pri kožnih boleznih.
7literatUra
1. Hubbard RE, Lang IA, Llewellyn DJ, Rockwood K. Frailty, body
mass index, and abdominal obesity in older people. J Gerontol
A Biol Sci Med Sci. 2010 Apr;65(4):377-81.
2. Morer C, Roques CF, Françon A, Forestier R, Maraver F. The
role of mineral elements and other chemical compounds used
in balneology: data from double-blind randomized clinical trials.
Int J Biometeorol. 2017 Dec;61(12):2159-73. 
3. Riyaz N, Arakkal FR. Spa therapy in dermatology. Indian J
Dermatol Venereol Leprol. 2011 Mar-Apr;77(2):128-34. 
4. Zöller N, Valesky E, Hofmann M, Bereiter-Hahn J, Bernd A1,
Kaufmann R, et al. Impact of Different Spa Waters on
Inflammation Parameters in Human Keratinocyte HaCaT Cells.
Ann Dermatol. 2015 Dec;27(6):709-14. 
5. Burns E, Nair S. New horizons in care home medicine. Age
Ageing. 2014 Jan;43(1):2-7.
6. Messinger-Rapport B. What's new in treating older adults?
Cleve Clin J Med. 2010 Nov;77(11):770-90. 
7. Lee HP, Choi YJ, Cho KA, Woo SY, Yun ST, Lee JT, et al. Effect
of Spa Spring Water on Cytokine Expression in Human
Keratinocyte HaCaT Cells and on Differentiation of CD4(+) T
Cells. Ann Dermatol. 2012 Aug;24(3):324-36. 
8. Carbajo JM, Maraver F. Salt water and skin interactions: new
lines of evidence. Int J Biometeorol. 2018 Aug;62(8):1345-60. 
9. Chebassier N, Ouijja el H, Viegas I, Dreno B. Stimulatory effect
of boron and manganese salts on keratinocyte migration. Acta
Derm Venereol. 2004;84(3):191-4.
10. Tenaud I, Leroy S, Chebassier N, Dreno B. Zinc, copper and
manganese enhanced keratinocyte migration through a
functional modulation of keratinocyte integrins. Exp Dermatol.
2000 Dec;9(6):407-16.
11. Tenaud I, Saiagh I, Dreno B. Addition of zinc and manganese to
a biological dressing. J Dermatolog Treat. 2009;20(2):90-3. 
12. Grinnell F. Wound repair, keratinocyte activation and integrin
modulation. J Cell Sci. 1992 Jan;101 ( Pt 1):1-5.
13. Tenaud I, Leroy S, Chebassier N, Dreno B. Modulation in vitro of
keratinocyte integrins by interferon-alpha and interferon-
gamma. Int J Dermatol. 2002 Dec;41(12):836-40.
14. Tacheau C, Weisgerber F, Fagot D, Bastien P, Verdier MP,
Liboutet M, et al. Vichy Thermal Spring Water (VTSW), a
cosmetic ingredient of potential interest in the frame of skin
11 farm vestn 2022; 73
IZ
V
IR
N
I Z
N
A
N
S
TV
E
N
I Č
LA
N
K
I
ageing exposome: an in vitro study. Int J Cosmet Sci. 2018
Aug;40(4):377-87.
15. Karagülle MZ, Karagülle M, Kılıç S, Sevinç H, Dündar C,
Türkoğlu M. In vitro evaluation of natural thermal mineral waters
in human keratinocyte cells: a preliminary study. Int J
Biometeorol. 2018 Sep;62(9):1657-61. 
16. Spilioti E, Vargiami M, Letsiou S, Gardikis K, Sygouni V,
Koutsoukos P, et al. Biological properties of mud extracts
derived from various spa resorts. Environ Geochem Health.
2017 Aug;39(4):821-33. 
17. Birch-Machin MA, Bowman A. Oxidative stress and ageing. Br
J Dermatol. 2016 Oct;175 Suppl 2:26-9.
18. Krutmann J, Bouloc A, Sore G, Bernard BA, Passeron T. The
skin aging exposome. J Dermatol Sci. 2017 Mar;85(3):152-61. 
19. Labarrade F, Bergeron L, Serre C, Lebleu A, Busuttil V, Botto
JM, et al. Modulating the expression of survivin and other basal
epidermal proteins protects human skin from UVB damage and
oxidative stress. J Cosmet Dermatol. 2015 Sep;14(3):191-203. 
20. Collober I, Noel-Hudson MS, Wepierre J, Montastier C. Activity
of Vittel water on proliferation of human fibroblasts, proliferation
and differentiation of human keratinocytes. Int J Cosmet Sci.
1994 Aug;16(4):149-60. 
21. Bikle DD, Pillai S. Vitamin D, calcium, and epidermal
differentiation. Endocr Rev. 1993 Feb;14(1):3-19.
22. Sasaki H, Itoh T, Akamatsu H, Okamoto H, Horio T. Effects of
calcium concentration on the SOD activity and UVB-induced
cytotoxicity in cultured human keratinocytes. Photodermatol
Photoimmunol Photomed. 2005 Feb;21(1):9-14.
23. Elkhyat A, Courderot-Masuyer C, Mac-Mary S, Courau S,
Gharbi T, Humbert P. Assessment of spray application of Saint
GERVAIS water effects on skin wettability by contact angle
measurement comparison with bidistilled water. Skin Res
Technol. 2004 Nov;10(4):283-6.
24. Ghersetich I, Brazzini B, Hercogova J, Lotti TM. Mineral waters:
instead of cosmetics or better than cosmetics? Clin Dermatol.
2001 Jul-Aug;19(4):478-82.
25. Gin H, Demeaux JL, Grelaud A, Grolleau A, Droz-Perroteau C,
Robinson P, et al. Observation of the long-term effects of
lifestyle intervention during balneotherapy in metabolic
syndrome. Therapie. 2013 May-Jun;68(3):163-7. 
26. Maeda T, Kudo Y, Horiuchi T, Makino N. Clinical and anti-aging
effect of mud-bathing therapy for patients with fibromyalgia. Mol
Cell Biochem. 2018 Jul;444(1-2):87-92. 
27. Hanson MA, Cooper C, Aihie Sayer A, Eendebak RJ, Clough
GF, Beard JR. Developmental aspects of a life course approach
to healthy ageing. J Physiol. 2016 Apr 15;594(8):2147-60. 
28. McLeod RP, Horowitz P, Fowler JF Jr, Eichenfield LF, Elias PM.
The basics of skin care: cleanse, moisturize, protect. Semin
Cutan Med Surg. 2013 Jun;32(2 Suppl 2):30-2.
29. Ramos-e-Silva M, Carneiro SC. Cosmetics for the elderly. Clin
Dermatol. 2001 Jul-Aug;19(4):413-23.
30. Terme Dobrna: Zdravilna termalna voda. 2019. Dostopno na:
http://www.terme-dobrna.si/wellness-zdravje/zdravilna-
termalna-voda (14. marec 2019).
31. Matheson-Shedrick K. Spas unwrapped. J Med Pract Manage.
2008 Nov-Dec;24(3):166-9.
32. Tagami H. Location-related differences in structure and function
of the stratum corneum with special emphasis on those of the
facial skin. Int J Cosmet Sci. 2008 Dec;30(6):413-34. 
33. Huang A, Seité S, Adar T. The use of balneotherapy in
dermatology. Clin Dermatol. 2018 May - Jun;36(3):363-8.
34. Soo JY, Jansen J, Masereeuw R, Little MH. Advances in
predictive in vitro models of drug-induced nephrotoxicity. Nat
Rev Nephrol. 2018 Jun;14(6):378-93. 
35. Truskey GA. Human Microphysiological Systems and Organoids
as in Vitro Models for Toxicological Studies. Front Public Health.
2018 Jul 10;6:185. 
12
U
Č
IN
K
I S
LO
V
E
N
S
K
E
 T
E
R
M
A
LN
E
 V
O
D
E
 N
A
 K
O
Ž
N
E
 C
E
LI
C
E
, G
O
JE
N
E
 IN
 V
IT
R
O
farm vestn 2022; 73