Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta Oznaka poročila: ARRS_ZV_RPROJ_ZP_2008/257 ZAKLJUČNO POROČILO O REZULTATIH RAZISKOVALNEGA PROJEKTA A. PODATKI O RAZISKOVALNEM PROJEKTU 1. Osnovni podatki o raziskovalnem projektu Šifra projekta Z4-9697 Naslov projekta Vizualizacija in interpretacija podatkov o izražanju genov v interakciji krompir-virus Vodja projekta 19116 Špela Baebler Tip projekta Zt Podoktorski projekt - temeljni Obseg raziskovalnih ur 3.400 Cenovni razred B Trajanje projekta 01.2007 - 12.2008 Nosilna raziskovalna organizacija 105 Nacionalni inštitut za biologijo Raziskovalne organizacije -soizvajalke Družbenoekonomski cilj 11 Neusmerjene raziskave (temeljne) 2. Sofinancerjil 1. Naziv Naslov 2. Naziv Naslov 3. Naziv Naslov B. REZULTATI IN DOSEŽKI RAZISKOVALNEGA PROJEKTA 3. Poročilo o realizaciji programa raziskovalnega projekta2 Uvod Rastline se v naravi srečujejo z vrsto dejavnikov iz okolja, vključno z napadi virusov, bakterij, gliv in drugih povzročiteljev bolezni. Poznavanje odnosa med rastlinami in povzročitelji bolezni je že dolgo predmet obsežnih raziskav, kajti le razumevanje tega odnosa omogoča iskanje ustreznih rešitev za zaščito rastlin pred povzročitelji bolezni. Projekt Z4-9697 Stran 1 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta Kljub temu, da je bilo objavljenih že veliko raziskav s tega področja (večinoma pri navadnem repnjakovcu, Arabidopsis thaliana), odgovor rastlin na napad povzročiteljev bolezni še zdaleč ni v celoti pojasnjen Razlog za to je velika kompleksnost odnosa rastlina - povzročitelj bolezni (Whitham s sod., 2006). Krompirjev virus YNTN (PVYNTN), ki povzroča obročkasto nekrozo gomoljev krompirja (Solanum tuberosum), je razširjen po celi Evropi, prisoten pa je tudi v Severni Ameriki in Aziji. Ker povzroča bolezenska znamenja tako na listih kot tudi gomoljih, pridelek zmanjšuje bolj kot ostali virusi, pri občutljivih sortah pa vpliva tudi na kakovost pridelka. Je ekonomsko najbolj škodljiv virus krompirja (Valkonen, 2007). Dosedanje raziskave so pokazale, da so različne sorte krompirja različno občutljive na PVYNTN, vendar mehanizmi, ki privedejo do razlik v občutljivosti, niso natančno poznani. Med najbolj občutljive sorte sodi nekoč zelo priljubljena slovenska sorta ‘Igor’. Pri odporni sorti ‘Sante’ odpornost izvira iz divje vrste krompirja Solanum stoloniferum (Ravnikar, 2005). Interakcija krompirja s PVYNTN je zelo dobro raziskana na morfološkem in biokemijskem nivoju, v zadnjem času pa je bila raziskana tudi na nivoju izražanja genov (Pompe Novak s sod., 2006) Prva in ključna faza študija odgovora rastline na okužbo je prepoznavanje razlik v izražanju genov po okužbi, zato imajo mikromreže pomembno vlogo v raziskavah odgovora rastline na povzročitelje bolezni. Z njihovo uporabo lahko identificiramo gene, vključene v obrambo rastline, možne regulatorne elemente in prepoznamo povezave med različnimi signalnimi potmi (Wise s sod., 2006). Vendar pa je transkriptomika, kot tudi druga področja kvantitativne sistemske biologije, tesno povezana s pridobivanjem velike količine podatkov, kar predstavlja izziv ne samo za biologe ampak tudi za statistike. Kompleksna analiza podatkov je tako lahko povezana s številnimi napačnimi zaključki in posledično z nezaupanjem v uporabljene metode. Čeprav so bili v zadnjem času objavljeni številni algoritmi in postopki za analizo podatkov mikromrež in je jasno, da lahko izbira analize znatno vpliva na rezultat, trenutno ni konsenza, katera metoda bi bila najboljša . Uporabljene metode je zato potrebno prilagoditi tako zasnovi poskusa kot tudi eksperimentalnemu sistemu (Nettleton, 2006). Pri rastlinah je problem uporabe mikromrež nezadostno poznavanje rastlinskega genoma in s tem nepravilna označenost transkriptov, katerih izražanje spremljamo (Rensink in Buell, 2005), pa tudi manjše število orodij, ki so prilagojena za analizo rastlinskih mikromrež (Tokimatsu s sod., 2005). Razvoj novih, zanesljivejših metod analize podatkov in njihove vizualizacije omogoča lažjo interpretacijo podatkov in s tem večji prispevek k reševanju bioloških problemov. Medtem ko je za statistično obdelavo in vizualizacijo (npr. združevanje genov) podatkov mikromrež na voljo precej, tako komercialno kot tudi prosto dostopnih orodij, so tista, ki omogočajo kombinacijo podatkov mikromrež z že obstoječimi biološkim znanjem, in tako postavijo pridobljene podatke v biološki kontekst, zelo redka. Osnova za delo na projektu so bili grobi podatki, pridobljeni s hidbridizacijo mikromrež TIGR (The Institute of Genomic Research). Na mikromrežah »potato 10K array« je točkovno nanesena cDNA približno 10000 različnih genov krompirja. V času prijave projekta so bile omenjene mikromreže edina platforma za analizo transkriptoma pri krompirju. Izsledki raziskav, da so uporabni tudi za ugotavljanje izražanja genov pri drugih sorodnih vrstah kot so paradižnik in tobak, pa kažejo na njihovo široko uporabnost v rastlinski biologiji. Vzorci RNA različnih sort krompirja, v različnih časih po Projekt Z4-9697 Stran 2 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta okužbi (30 minut do 24 ur) z virusom PVYNTN, so bili hibridizirani na mikromreže v parih okužene-slepo inokulirane rastline. Namen eksperimentov je bil ugotoviti različno izražanje genov v odvisnosti od časa po okužbi ter razlike v izražanju med sortami, ki so različno občutljive na virus. V okviru podoktorskega projekta smo nadaljevali zastavljeno delo v smislu izboljšanja analize podatkov, njihove interpretacije in vizualizacije. Tako smo po eni strani razvili postopke analize in interpretacije podatkov (Rotter s sod., 2007; Rotter s sod., 2008) ter po drugi strani ugotovili pomembne razlike v zgodnjem odgovoru različno občutljivih sort krompirja na okužbo z virusom PVYNTN (Baebler s sod., 2009). Kontrola kvalitete in predprocesiranje V prvi fazi projekta smo smo ugotavljali, kako različne načini predprocesiranja (korekcija ozadja, normalizacija, obravnava podvojenih točk) podatkov, pridobljenih z analizo mikromrež krompirja, vplivajo na rezultate statistične analize. Ugotovili smo, da lahko uporabljene metode znatno vplivajo na rezultate, zato smo postavili shemo predprocesiranja podatkov, po kateri glede na tip podatkov in njihovo kvaliteto uporabimo različne metode predprocesiranja, kot končni rezultat pa uporabimo presek rezultatov, ki jih dobimo po posameznih analizah (Slika 1, Rotter s sod., 2008) in tako povečamo zanesljivost dobljenih rezultatov. Postavljeno shemo analize podatkov smo uporabili pri analizah podatkov v okviru drugih projektov. Prenos podatkov v javno dostopne baze podatkov Zaradi različnih možnosti analize mikromrež (platforme, analiza podatkov), morajo biti podatki o eksperimentu ter vsi grobi podatki izvedenih eksperimentov shranjeni v javne baze podatkov. “Minimum information about microarray experiment” (MIAME) standard definira katere informacije so potrebne, da podatke lahko interpretiramo, ali da eksperiment ponovimo (Brazma s sod., 2001). Podatke o eksperimentih smo v ustrezni obliki deponirali v javno bazo Gene Expression Omnibus (GEO, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/), kot Series GSE10903 in Series GSE12041. Vzpostavili smo tudi avtomatizirano pripravo datotek, ki so primerne za deponiranje v bazo. Vizualizacija Pprilagodili smo orodje za vizualizacijo podatkov izražanja genov MapMan za prikaz podatkov pridobljenimi z mikromrežami »TIGR potato 10k array«. Vizualizacija temelji na razvrstitvi genov v sklope, ki predstavljajo metabolne poti oz. procese, v katerih sodelujejo. Ker je bilo orodje originalno razvito za rastlino Arabidopsis thaliana, smo veliko pozornosti namenili razvrščanju genov, ki so specifični za krompir ali drugerastline iz družine razhudnikovk. V naslednji fazi smo se osredotočili na procese, ki so vključeni v biotske interakcije, ki v originalni verziji orodja niso bili dobro obdelani. Za lažjo vizualizacijo interakcij smo pripravili shemo »Biotic stress«, ki vključuje skupine genov, ki sodelujejo v biotskih interakcijah (Slika 2). Nova anotacija in shema sta uporabna za vizualizacijo podatkov v drugih eksperimentalnih sistemih, kar bo omogočilo primerjavo rezultatov ter posledično boljše razumevanje interakcije rastlina – povzročitelj bolezni Projekt Z4-9697 Stran 3 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta (Rotter s sod., 2007). Datoteke, ki so potrebne za vizualizacijo (Stu_TIGR mapping file in Biotic stress pathway) so javno dostopne na Internetni strani: http://gabi.rzpd.de/database/java-bin/MappingDownloader . V zadnjem letu trajanja projekta smo na podoben način pripravili vizualizacijo za mikromreže POCI (Potato Oligo Chip Initiative, Agilent Custom Arrays), ki bodo zaradi velike kvalitete pridobljenih podatkov uporabljane v veliki meri. Izražanje genov v zgodnjem odtzivu rastlin krompirja na okužbo z virusom PVYNTN Poglobljena analiza in komplementacija podatkov mikromrež, subtrakcijskih knjižnic in PCR v realnem času nam je omogočila biološko relevantno interpretacijo rezultatov (Slika 3). Ugotovili smo zanimive razlike v izražanju genov po okužbi z virusom PVYNTN, pri dveh različno občutljivih sortah krompirja, v prvih 12 urah po inokulaciji z virusom. Pri obeh sortah so ugotovili povečano izražanje genov, vključenih v fotosintezo pol ure po okužbi in zmanjšano izražanje teh genov 12 ur po okužbi. Geni, ki so se pri omenjenih sortah izražali različno, so bili vključeni v vključeni v metabolizem celične stene, rastlinskih hormonov, sekundarnih metabolitov in obrambne procese, kar nakazuje na aktivacijo obrambnega odgovora pri odporni sorti že 12 ur po inokulaciji (Slika 2). Rezultate smo objavili v vrhunski reviji na področju rastlinske biologije (Baebler s sod., 2009). Reference Baebler Š et al (2009) PVYNTN elicits a diverse gene expression response in different potato genotypes in the first 12 h after inoculation. Mol Plant Pathol 10 (2):263-275 Brazma A et al (2001) Minimum information about a microarray experiment (MIAME)-toward standards for microarray data. Nat Genet, 29, 4: 365-371 Nettleton D (2006) A discussion of statistical methods for design and analysis of microarray experiments for plant scientists. Plant Cell 18 (9):2112-2121. Pompe-Novak M et al (2006) Potato virus Y induced changes in the gene expression of potato (Solanum tuberosum L.). Physiol Mol Plant Pathol 67:237-247. Ravnikar M (2005) Potato virus Y and its interaction with potato. In Plant Genomics and Bioinformatics Expression Micro Arrays and Beyond: A Course Book (Freitag, J., ed.), pp. 66–71 Ljubljana, National Institute of Biology. Rensink W.A., Buell C.R. 2005. Microarray expression profiling resources for plant genomics. Trends Plant Sci, 10, 12: 603-609 Rotter A et al (2007) Adaptation of the MapMan ontology to biotic stress responses: application in solanaceous species. Plant Methods 3 (1):10. Rotter A et al (2008) Finding differentially expressed genes in two-channel DNA microarray datasets: how to increase reliability of data preprocessing. OMICS. 12 (3):171-182. Tokimatsu T et al (2005) KaPPA-View. A Web-Based Analysis Tool for Integration of Transcript and Metabolite Data on Plant Metabolic Pathway Maps. Plant Physiol, 138, 3: 1289-1300 Valkonen JPT (2007) Viruses: Economical Loses and Biotechnological Potential. In: Potato Biology and Biotechnology Advances and Perspectives (Vreugdenhil D, ed.), pp. 619-641, Elsevier, Amsterdam. Whitham SA, Yang C, and Goodin MM (2006) Global impact: elucidating plant responses to viral infection. Mol Plant Microbe Interact. 19 (11):1207-1215. Wise RP et al (2007) Transcript profiling in host-pathogen interactions. Annu Rev Phytopathol. 45:329-369. Podnapisi k slikam Projekt Z4-9697 Stran 4 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta Slika 1: Predlagana shema predprocesiranja in analize podatkov cDNA mikromrež Slika 2: Vizualizacija podatkov o izražanju genov , vključenih v odziv rastline na biotski stres, z orodjem MapMan. Z barvnimi kvadratki je prikazan log2 razmerja med izražanjem v okuženih in slepo inokuliranih rastlinah za posamezen gen (rdeča - povečano izražanje, zelena - zmanjšano izražanje). Slika 3: Povezovanje podatkov različnih metod transkriptomike za vrednotenje zgodnjega odziva rastlin krompirja na virus. 4. Ocena stopnje realizacije zastavljenih raziskovalnih ciljev3 Glede na zastavljene cilje smo izvedli večino predvidenega raziskovalnega dela na projektu. Iz rezultatov projekta smo objavili 3 znanstvene članke, rezultati pa so bili predstavljeni na devetih različnih znanstvenih srečanjih. Potrdili smo raziskovalno hipotezo, da je obdelava podatkov pri tako kompleksnih raziskavah, kot so mikromreže, izredno pomembna. Pri obdelavi je potrebno upoštevati tako zasnovo poskusa, platformo mikromrež kot tudi kvaliteto samih podatkov. Prav tako smo po prilagoditvi orodja MapMan ugotovili, da so že v zgodnjem odzivu rastlin krompirja na virus različno izrazijo skupine genov, za katere je znano, da sodeljujejo v obrambnih procesih rastline. Uporaba orodja nam je omogočila nov pogled na same rezultate o izražanju genov. Poglobljena analiza podatkov nam je omogočila identifikacijo tarčnih markerskih genov, katerih izražanje spremljamo v nadaljnih raziskavah na področju interakcije krompir -virus. Identificirali smo tudi gene, vključene v obrambne procese, metabolizem celične stene in sladkorjev, za katere smo ugotovili, da bi bili lahko vključeni v odpornost rastlin na viruse. S funkcionalno analizo bomo poizkusili potrditi njihovo vlogo tako, da bomo s stabilno transformacijo v odpornih rastlinah izbrane gene utišali, v občutljivih pa njihovo izražanje povečali. Nato bomo spremljali spremembe v občutljivosti in drugih fizioloških dejavnikih po okužbi z virusom. 5. Utemeljitev morebitnih sprememb programa raziskovalnega projekta4 Ni vsebinskih sprememb projekta 6. Najpomembnejši znanstveni rezultati projektne skupine5 Znanstveni rezultat 1. Naslov SLO Profil izražanja genov zgodnjem odgovoru na virus pri različno občutljivih sortah krompirja ANG Gene expression profile in the early response to virus in differentially sensitive cultivars Opis SLO Avtorji so ugotavljali razlike v izražanju genov po okužbi z virusom PVYNTN, pri dveh različno občutljivih sortah krompirja, v prvih 12 urah po inokulaciji z virusom. Pri obeh sortah so ugotovili povečano izražanje genov, vključenih v fotosintezo pol ure po okužbi in zmanjšano izražanje 12 ur po okužbi. Geni, ki so se pri omenjenih sortah izražali različno so bili vključeni v vključeni v Projekt Z4-9697 Stran 5 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta ANG metabolizem celične stene, rastlinskih hormonov, sekundarnih metabolitov in obrambne procese. Rezultate so avtorji objavili v vrhunski reviji na področju rastlinske biologije. Differences in gene expression in the first 12 hours after virus inoculation were investigated in two differently sensitive potato cultivars. In both cultivars, genes involved in photosynthesis were upregulated at 30 minutes and downregulated 12 hours following virus inoculation. Genes that responded differently in the two cultivars were involved in cell wall, plant hormones and secondary metabolite metabolism, signalling and defence. The results were published in one of the top journals in the field of plant science. Objavljeno v BAEBLER, Špela, KREČIČ STRES, Hana, ROTTER, Ana, KOGOVŠEK, Polona, CANKAR, Katarina, KOK, Esther, GRUDEN, Kristina, KOVAČ, Maja, ŽEL, Jana, POMPE NOVAK, Maruša, RAVNIKAR, Maja. PVYNTN elicits a diverse gene expression response in different potato genotypes in the first 12 h after inoculation. Mol. plant pathol., 2009, vol. 10, no. 2, str. 263-275. JCR IF (2007): 3.385, SE (17/152), plant sciences, x: 1.733 Tipologija 1.01 Izvirni znanstveni članek COBISS.SI-ID 1940815 2. Naslov SLO ANG Prilagoditev orodja MapMan za vizualizacijo podatkov o izražanju genov pri krompirju Adaptation of tool for visualization of potato gene expression data Opis SLO ANG V sodelovanju z avtorji orodja za vizualizacijo MapMan, ki je bilo originalno pripravljen za navadnega repnjakovca (Arabidopsis thaliana) smo prilagodili orodje tako, da je z njim možna vizualizacija podatkov pridobljenimi z mikromrežami potato TIGR 10k. Posebej smo se osredotočili na vizualizacijo na nivoju izražanja genov odgovora rastline na biotski stres. Tako smo izboljšali biološko interpretacijo podatkov. In collaboration with the authors of MapMan, an omics data visualization tool, originally developed for Arabidopsis, we have adapted the tool to allow visualization of potato TIGR 10k gene expression data. Special emphasis was given to the visualization of the expression of genes involved in the biotic stress response. In this way, biological interpretation of potato gene expression data was improved. Objavljeno v ROTTER, A., USADEL, B., BAEBLER, Š., STITT, M., GRUDEN, K. Adaptation of the MapMan ontology to biotic stress responses: application in solanaceous species. Plant methods, 2007, 3(10), p. [1-9]. Tipologija 1.01 Izvirni znanstveni članek COBISS.SI-ID 23317465 3. Naslov SLO ANG Izboljšanje analize podatkov mikromrež Improvement of microarray data analysis Opis SLO ANG Z namenom izboljšanja zanesljivosti rezultatov analize izražanja genov z mikromrežami smo ugotavljali, kako različne načini predprocesiranja (korekcija ozadja, normalizacija, obravnava podvojenih točk) podatkov vplivajo na rezultate statistične analize. Ker smo ugotovili da je vpliv znaten, smo predlagali shemo predprocesiranja podatkov, po kateri glede na tip podatkov in njihovo kvaliteto, uporabimo različne metode predprocesiranja, kot končni rezultat pa uporabimo presek rezultatov, ki jih dobimo po posameznih analizah. With a goal to increase robustness of microarray data we have studied the effect of different preprocessing methods (background correction, normalization, dealing with duplicate spots) on final results of statistical analysis. Since the effect was found to be significant, we have proposed a data analysis workflow where preprocessing methods are selected on the basis of data type and quality and an intersection of results obtained by two different preprocessing methods is used as a final differentially expressed gene list. Objavljeno v ROTTER, A., HREN, M., BAEBLER, Š., BLEJEC, A., GRUDEN, K. Finding differentially expressed genes in two-channel DNA microarray datasets: how to increase reliability of data preprocessing. Omics (Larchmt. N.Y.), 2008, vol. 12, no. 3, str. 171-182JCR IF (2007): 3.013; Tipologija 1.01 Izvirni znanstveni članek Projekt Z4-9697 Stran 6 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta COBISS.SI-ID 1888847 4. Naslov SLO Razvoj in objava protokolov za analizo mikromrež ANG Development and publication of protocols for potato microarray analysis Opis SLO Z analizo mikromrež lahko ugotavljamo, kateri geni, proteini in signalne molekule so ključni za odgovor rastlin na povzročitelje bolezni. V poglavju v knjigi Plant Virology Protocols smo objavili postopke priprave vzorcev, hibridizacije mikromrež krompirja »potato TIGR 10k arrays« in obdelave podatkov, ki smo jih razvili na Oddelku. Knjiga je v spletni knjigarni Amazon.com druga najbolje prodajana med knjigami s področja rastlinske molekularne biologije. ANG Microarray analysis enables identification of genes, proteins and signal molecules involved in plant response to pathogen infection. In a chapter in the book Plant Virology Protocols we have published protocols for sample preparation, »potato TIGR 10k arrays« microarray hybridization and data analysis. All protocols were developed at our Department. The book rates as second most sold in the field of plant molecular biology on web store Amazon.com. Objavljeno v GRUDEN, K., POMPE NOVAK, M., BAEBLER, Š., KREČIČ STRES, H., TOPLAK, N., HREN, M., KOGOVŠEK, P., GOW, L., FOSTER, G.D., BOONHAM, N., RAVNIKAR, M. Expression microarrays in plant-virus interaction. V: FOSTER, Gary D. (ur.). Plant virology protocols : from viral sequence to protein function, (Methods in molecular biology, 451). 2nd ed. Totowa: Humana Press, 2008, 2008, str. 583-613. Tipologija 1.16 Samostojni znanstveni sestavek ali poglavje v monografski publikaciji COBISS.SI-ID 1859407 5. Naslov SLO ANG Opis SLO ANG Objavljeno v Tipologija COBISS.SI-ID 7. Najpomembnejši družbeno-ekonomsko relevantni rezultati projektne skupine6 Družbeno-ekonomsko relevantni rezultat Naslov SLO Vabljeno predavanje na mednarodnem posvetu »Biološka znanost in družba« ANG Invited lecture on the international conference »Bioscience and Society« Opis SLO Na mednarodnem posvetu, ki je bil v prvi vrsti namenjen učiteljem biologije in naravoslovnih ved, je Špela Baebler predstavila novo področje sistemske biologije. V okviru posveta smo pripravili tudi obsežnejše gradivo o tematiki, ki je objavljeno v zborniku posveta. Vsa gradiva, vključno s predstavitvijo in posnetki predavanja so dostopna na spletu: http://www.zrss.si/geni/posnetki.htm ANG At the conference, intended primarily for the education of biology and other life science teachers, Špela Baebler presented an emerging field of systems biology. A comprehensive study material was prepared and is available, together with presentation and conference videos, at the conference website: http://www.zrss.si/geni/posnetki.htm. Šifra B.04 Vabljeno predavanje Objavljeno v BAEBLER, Š., GRUDEN, K.. Sistemska biologija = Systems biology. V: STRGULC-KRAJŠEK, S. (ur.), POPIT, T. (ur.), VIČAR, M. (ur.), SCHRADER, Š. Mednarodni posvet Biološka znanost in družba = Conference on Bioscience and Society, October 4-5, 2007, Ljubljana, Slovenia. Genialna prihodnost -genetika, determinizem in svoboda : zbornik prispevkov : proceedings. 1. natis. Ljubljana: Zavod RS za šolstvo, 2007, str. 213-233. 1.06 Objavljeni znanstveni prispevek na konferenci (vabljeno Projekt Z4-9697 Stran 7 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta Tipologija predavanje) COBISS.SI-ID 23325401 2. Naslov SLO ANG Uporaba mikromrež v farmacevtski industriji Microarray analysis in the pharmaceutical industry Opis SLO ANG Špela Baebler je vključena v izvajanje treh različnih projektov s področja uporabe mikromrež s farmacevtskim podjetjem Lek d.d. (BIO 6/2006, Uvedba uporabe DNA čipov pri preučevanju transkriptoma bakterije E. coli, Gruden, 2006; RU-116/2006, Raziskave učinkovin, Gruden; 5-057/2004 -2008, Izboljšava proizvodnih sevov s tehnologijo genskih mikromrež, Gruden). V okviru projektov razvijamo metode transkriptomike in bioinformatike za evaluacijo produkcije in delovanja farmacevtskih učinkovin. Špela Baebler is involved in three different in the field of microarray analysis with pharmaceutical company Lek d.d. (BIO 6/2006, Uvedba uporabe DNA čipov pri preučevanju transkriptoma bakterije E. coli, Gruden, 2006; RU-116/2006, Raziskave učinkovin, Gruden; 5-057/2004 -2008, Izboljšava proizvodnih sevov s tehnologijo genskih mikromrež, Gruden). In the framework of the projects we are developing and implementing transcriptomic and bioinformatics methods for evaluation of compound production and mechanism of action. Šifra F.17 Prenos obstoječih tehnologij, znanj, metod in postopkov v prakso Objavljeno v BAEBLER, Š., ROTTER, A., GRUDEN, K. Poročilo študije analize delovanja novih inhibitorjev encimov Mur ligaz v bakterijski kulturi Staphylococcus aureus = Final report of study in the field of studying inhibitors targeting Mur-ligases pathway in Staphylococcus aureus. Ljubljana: Nacionalni iništitut za biologijo, 2007. [27] str., ilustr,. tabele. Tipologija 2.12 Končno poročilo o rezultatih raziskav COBISS.SI-ID 24136409 3. Naslov SLO ANG Izobraževanje za uporabnike PCR v realnem času Real-time PCR users training Opis SLO ANG Na Oddelku smo 1-2 krat letno izvajali 3 dnevne praktične delavnice PCR v realnem času, katerih končni cilj je bila usposobljenost uporabnikov za samostojno delo na aparaturi. Tako smo razširili krog uporabnikov opreme in omogočili njeno boljšo izkoriščenost. Izobraževanje, ki ga je vodila dr. Špela Baebler, se je udeležilo preko 50 uporabnikov, sodelavcev NIB kot tudi drugih sodelujočih organizacij iz Slovenije (Lek, BIA separations, Čistina naprava Domžale, Univerza v Ljubljani, Institut Jožef Stefan) in tujine (Hrvaška, Bosna, Poljska, Romunija). With a goal to train users to be able to use the real-time PCR equipment autonomously we organised 3-day hands-on workshops. Practical training expanded number of users and the equipment usage. Training, led by dr. Špela Baebler, was attended by more than 50 users, from our Department as well as from cooperating organisations from Slovenia (BIA separations, Čistina naprava Domžale, Ljubljana University, Jožef Stefan Institute, Lek) and abroad (Croatia, Bosnia, Poland, Romania). Šifra F.03 Večja usposobljenost raziskovalno-razvojnega osebja Objavljeno v ni objave Tipologija 3.25 Druga izvedena dela COBISS.SI-ID 4. Naslov SLO ANG Opis SLO ANG Šifra Objavljeno v Tipologija Projekt Z4-9697 Stran 8 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta COBISS.SI-ID 5. Naslov SLO ANG Opis SLO ANG Šifra Objavljeno v Tipologija COBISS.SI-ID 8. Pomen raziskovalnih rezultatov projektne skupine2 8.1. Pomen za razvoj znanosti8 SLO_____________________________________________________________________________________________________________ Na osnovi raziskav izvedenih v okviru projekta smo izdelali robustno shemo analize podatkov cDNA mikromrež (Rotter s sod., 2008), ki smo jo uporabili pri analizi podatkov mikromrež krompirja in drugih organizmov. Velik delež transkriptomskih raziskav pri rastlinah je bila opravljen pri navadnem repnjakovcu, ki je sicer dobra modelna rastlina, vendar pa v nekaterih primerih podatkov ne moremo direktno prenesti na poljščine. Krompir je četrta najpomembnejša poljščina, uporabna za prehrano, zato so raziskave pri tej rastlini še toliko bolj pomembne. Poleg tega je krompirjev virus Y najpomembnejši patogeni virus pri krompirju. Prilagoditev analize podatkov in vizualizacije izražanja genov v okviru bioloških procesov in metabolnih poti je znatno prispevalo k interpretaciji transkriptomskih podatkov za krompir. Prilagoditev vizualizacije za takrat edine dostopne mikromreže za spremljanje izražanja genov pri krompirju, objavljena kot Open Acces članek (Rotter s sod., 2007) in na internetni strani orodja MapMan (http://www.gabipd.org/projects/MapMan), je imela zelo dober odziv v mednarodni raziskovalni sferi. Članek je bil v dobrem letu po objavi večkrat citiran, avtorji pa so tudi uporabili na novo pripravljeno mapiranje in shemo vizualizacije odgovora na biotski stres (npr. Reiwe s sod., 2007; Uppalapati s sod., 2009). Zato pričakujemo, da bo tudi mapiranje za nove mikromreže krompirja (POCI, Agilent) široko uporabljano. Prilagoditev orodja za vizualizacijo nam je omogočila poglobljeno analizo transkriptomskih rezultatov, ki smo jih objavili v vrhunski reviji na področju znanosti o rastlinah. Prvi smo poročali o zelo zgodnjem odzivu rastline na inokulacijo z virusi na nivoju izražanja genov (Baebler s sod., 2009). Poleg tega smo na podlagi teh analiz izbrali markerske gene, ki jih uporabljamo v nadaljnjih raziskavah ter kandidatne gene za funkcionalno analizo njihove vloge v odgovoru rastlin krompirja na okužbo z virusi. Reference: Baebler Š et al (2009) PVYNTN elicits a diverse gene expression response in different potato genotypes in the first 12 h after inoculation. Mol Plant Pathol 10 (2):263-275 Riewe D et al (2008) The Potato-Specific Apyrase Is Apoplastically Localized and Has Influence on Gene Expression, Growth, and Development. Plant Physiol. 147 (3):1092-1109. Rotter A et al (2007) Adaptation of the MapMan ontology to biotic stress responses: application in solanaceous species. Plant Methods 3 (1):10. Rotter A et al (2008) Finding differentially expressed genes in two-channel DNA microarray datasets: how to increase reliability of data preprocessing. OMICS. 12 (3):171-182. Uppalapati SR et al (2009) Global Gene Expression Profiling During Medicago truncatula- Phymatotrichopsis omnivora Interaction Reveals a Role for Jasmonic Acid, Ethylene, and the Flavonoid Pathway in Disease Development. MPMI 22 (1):7. ANG A robust scheme of microarray data analysis was developed in the framework of the project (Rotter et al, 2008) and was used in potato as well as other transcriptomic projects. A great deal of plant transcriptomic data is derived from a model plant, Arabidopsis thaliana. Projekt Z4-9697 Stran 9 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta However in some cases, model plant data cannot be directly implemented in crop species. Potato is fourth most important food crop; therefore its research has important implications in agronomy. Moreover potato virus Y is the most detrimental potato viral pathogen. Adaptation of gene expression data visualisation in the context of biological pathways greatly improved transtriptomic data of the interaction. The adaptation of visualization of potato cDNA microarrays data, published as an Open Acess paper (Rotter et al, 2007) as well as on MapMan webpage http://www.gabipd.org/projects/MapMan/ received great response in the international scientific community. In a year after its publication, the paper was cited several times and the use of mapping or new scheme of biotic stress response was reported (e.g. Reiwe et al, 2007; Uppalapati et al, 2009). Therefore, we expect that the mapping for new potato oligonucleotide arrays (Agilent POCI array) will receive same if not greater response. Improved data analysis with efficient data interpretation enabled a thorough analysis of potato-virus interaction microarray data and its publishing in one of the top Plant Science journals (Baebler et al., 2009). Moreover, interaction marker genes and candidate genes for functional analyses were identified as a result of the research in the framework of the postdoctoral project. References: Baebler Š et al (2009) PVYNTN elicits a diverse gene expression response in different potato genotypes in the first 12 h after inoculation. Mol Plant Pathol 10 (2):263-275 Riewe D et al (2008) The Potato-Specific Apyrase Is Apoplastically Localized and Has Influence on Gene Expression, Growth, and Development. Plant Physiol. 147 (3):1092-1109. Rotter A et al (2007) Adaptation of the MapMan ontology to biotic stress responses: application in solanaceous species. Plant Methods 3 (1):10. Rotter A et al (2008) Finding differentially expressed genes in two-channel DNA microarray datasets: how to increase reliability of data preprocessing. OMICS. 12 (3):171-182. Uppalapati SR et al (2009) Global Gene Expression Profiling During Medicago truncatula- Phymatotrichopsis omnivora Interaction Reveals a Role for Jasmonic Acid, Ethylene, and the Flavonoid Pathway in Disease Development. MPMI 22 (1):7. 8.2. Pomen za razvoj Slovenije2 SLO_____________________________________________________________________________________________________________ Čeprav so mikromreže zelo močno orodje raziskav, ne samo v rastlinski biologiji ampak tudi v mikrobiologiji, medicini in farmaciji, je njihova uporaba vezana na redke raziskovalne inštitucije. Razlog je kompleksnost samih postopkov hibridizacije in še bolj analize in interpretacije podatkov. Slovenska farmacevtska industrija (predvsem Lek) je svoj interes za uporabo te tehnologije nakazala že z vključitvijo Konzorcij za opremo za pripravo in analizo bio-čipov v okviru Centra za funkcijsko genomiko in biočipe. Izsledki pričujočih raziskav so bili izredno pomembni pri povezovanju Oddelka s podjetjem Lek, saj smo prav v času trajanja projekta sodelovali na 3 različnih projektih, ki so vključevali analizo mikromrež na različnih področjih produkcije in razvoja učinkovin. Rezultati tega sodelovanja so tako prispevali k izkoriščanju potenciala tehnologije mikromrež v industriji in tako h gospodarski rasti in konkurenčnosti Republike Slovenije. Rezultate projekta smo predstavili v okviru 3 vrhunskih mednarodnih člankov in na več mednarodnih znanstvenih srečanjih ter tako povečali prepoznavnost Republike Slovenije. ANG Despite a high potential of microarray analysis, not only in plant science but also in microbiology, medicine and pharmacy, their use is often limited to rare research institutions. The reason lies in the complexity of microarray labelling and hybridization and especially data analysis and interpretation. Slovenian pharmaceutical industry (especially Lek d.d.) has shown its interest in the technology by joining the Consortium for biochip preparation and analysis equipment in the framework of the Centre of Functional Genomics and Biochips. Projekt Z4-9697 Stran 10 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta The results of our research were directly connected in our collaboration with Lek. In the time of the duration of the projects, we had three projects, all connected with the use of microarrays in drug production and development. The results of our collaboration have therefore contributed to economical growth and competitive position of Slovenia. The project results were presented as papers in international journals and at several international scientific meetings and therefore increased international recognition of Slovenia. 9. Samo za aplikativne projekte! Označite, katerega od navedenih ciljev ste si zastavili pri aplikativnem projektu, katere konkretne rezultate ste dosegli in v kakšni meri so doseženi rezultati uporabljeni Cilj F.01 Pridobitev novih praktičnih znanj, informacij in veščin Zastavljen cilj (~ DA C NE Rezultat Uporaba rezultatov F.02 Pridobitev novih znanstvenih spoznanj Zastavljen cilj (~ DA C NE Rezultat Uporaba rezultatov F.03 Večja usposobljenost raziskovalno-razvojnega osebja Zastavljen cilj f~ DA C NE Rezultat Uporaba rezultatov F.04 Dvig tehnološke ravni Zastavljen cilj (~ DA f* NE Rezultat Uporaba rezultatov F.05 Sposobnost za začetek novega tehnološkega razvoja Zastavljen cilj (~ DA C NE Rezultat Uporaba rezultatov F.06 Razvoj novega izdelka Zastavljen cilj (~ DA C NE Rezultat Uporaba rezultatov F.07 Izboljšanje obstoječega izdelka Zastavljen cilj (~ DA C NE Rezultat Uporaba rezultatov F.08 Razvoj in izdelava prototipa Projekt Z4-9697 Stran 11 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.09 Razvoj novega tehnološkega procesa oz. tehnologije Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.10 Izboljšanje obstoječega tehnološkega procesa oz. tehnologije Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.11 Razvoj nove storitve Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.12 Izboljšanje obstoječe storitve Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.13 Razvoj novih proizvodnih metod in instrumentov oz. proizvodnih procesov Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.14 Izboljšanje obstoječih proizvodnih metod in instrumentov oz. proizvodnih procesov Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.15 Razvoj novega informacijskega sistema/podatkovnih baz Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.16 Izboljšanje obstoječega informacijskega sistema/podatkovnih baz Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.17 Prenos obstoječih tehnologij, znanj, metod in postopkov v prakso Projekt Z4-9697 Stran 12 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.18 Posredovanje novih znanj neposrednim uporabnikom (seminarji, forumi, konference) Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.19 Znanje, ki vodi k ustanovitvi novega podjetja ("spin off") Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.20 Ustanovitev novega podjetja ("spin off") Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.21 Razvoj novih zdravstvenih/diagnostičnih metod/postopkov Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.22 Izboljšanje obstoječih zdravstvenih/diagnostičnih metod/postopkov Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.23 Razvoj novih sistemskih, normativnih, programskih in metodoloških rešitev Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.24 Izboljšanje obstoječih sistemskih, normativnih, programskih in metodoloških rešitev Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.25 Razvoj novih organizacijskih in upravljavskih rešitev Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.26 Izboljšanje obstoječih organizacijskih in upravljavskih rešitev Projekt Z4-9697 Stran 13 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.27 Prispevek k ohranjanju/varovanje naravne in kulturne dediščine Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.28 Priprava/organizacija razstave Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.29 Prispevek k razvoju nacionalne kulturne identitete Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.30 Strokovna ocena stanja Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.31 Razvoj standardov Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.32 Mednarodni patent Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.33 Patent v Sloveniji Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.34 Svetovalna dejavnost Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Rezultat Uporaba rezultatov F.35 Drugo Zastavljen cilj nmlkj DA nmlkj NE Projekt Z4-9697 Stran 14 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta Rezultat Uporaba rezultatov Komentar 10. Samo za aplikativne projekte! Označite potencialne vplive oziroma učinke vaših rezultatov na navedena področja Vpliv Ni vpliva Majhen vpliv Srednji vpliv Velik vpliv G.01 Razvoj visoko-šolskega izobraževanja G.01.01. Razvoj dodiplomskega izobraževanja r r r r G.01.02. Razvoj podiplomskega izobraževanja r r r r G.01.03. Drugo: r r r r G.02 Gospodarski razvoj G.02.01 Razširitev ponudbe novih izdelkov/storitev na trgu r r r r G.02.02. Širitev obstoječih trgov r r r r G.02.03. Znižanje stroškov proizvodnje r r r r G.02.04. Zmanjšanje porabe materialov in energije r r r r G.02.05. Razširitev področja dejavnosti r r r r G.02.06. Večja konkurenčna sposobnost r r r r G.02.07. Večji delež izvoza r r r r G.02.08. Povečanje dobička r r r r G.02.09. Nova delovna mesta r r r r G.02.10. Dvig izobrazbene strukture zaposlenih r r r r G.02.11. Nov investicijski zagon r r r r G.02.12. Drugo: r r r r G.03 Tehnološki razvoj G.03.01. Tehnološka razširitev/posodobitev dejavnosti r r r r G.03.02. Tehnološko prestrukturiranje dejavnosti r r r r G.03.03. Uvajanje novih tehnologij r r r r G.03.04. Drugo: c r r r G.04 Družbeni razvoj G.04.01 Dvig kvalitete življenja c r r r G.04.02. Izboljšanje vodenja in upravljanja r r r r G.04.03. Izboljša nje delovanja administracije r r r r Projekt Z4-9697 Stran 15 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta in javne uprave G.04.04. Razvoj socialnih dejavnosti r r r r G.04.05. Razvoj civilne družbe r r r r G.04.06. Drugo: r r r r G.05. Ohranjanje in razvoj nacionalne naravne in kulturne dediščine in identitete r r r r G.06. Varovanje okolja in trajnostni razvoj r r r r G.07 Razvoj družbene infrastrukture G.07.01. Informacijsko-komunikacijska infrastruktura r r r r G.07.02. Prometna infrastruktura r r r r G.07.03. Energetska infrastruktura r r r r G.07.04. Drugo: r r r r G.08. Varovanje zdravja in razvoj zdravstvenega varstva r r r r G.09. Drugo: r r r r Komentar 11. Pomen raziskovanja za sofinancerje, navedene v 2. točki10 1. Sofinancer Vrednost sofinanciranja za celotno obdobje trajanja projekta je znašala: EUR Odstotek od utemeljenih stroškov projekta: % Najpomembnejši rezultati raziskovanja za sofinancerja Šifra 1. 2. 3. 4. 5. Komentar Ocena 2. Sofinancer Vrednost sofinanciranja za celotno obdobje trajanja projekta je znašala: EUR Odstotek od utemeljenih stroškov projekta: % Projekt Z4-9697 Stran 16 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta Najpomembnejši rezultati raziskovanja za sofinancerja Šifra 1. 2. 3. 4. 5. Komentar Ocena 3. Sofinancer Vrednost sofinanciranja za celotno obdobje trajanja projekta je znašala: EUR Odstotek od utemeljenih stroškov projekta: % Najpomembnejši rezultati raziskovanja za sofinancerja Šifra 1. 2. 3. 4. 5. Komentar Ocena C. IZJAVE Podpisani izjavljam/o, da: • so vsi podatki, ki jih navajamo v poročilu, resnični in točni • se strinjamo z obdelavo podatkov v skladu z zakonodajo o varstvu osebnih podatkov za potrebe ocenjevanja, za objavo 6., 7. in 8. točke na spletni strani http://sicris.izum.si/ ter obdelavo teh podatkov za evidence ARRS • so vsi podatki v obrazcu v elektronski obliki identični podatkom v obrazcu v pisni obliki Podpisi: Špela Baebler in/ali podpis vodje raziskovalnega projekta zastopnik oz. pooblaščena oseba RO Kraj in datum: Ljubljana 16.4.2009 Projekt Z4-9697 Stran 17 od 18 Zaključno poročilo o rezultatih raziskovalnega projekta Oznaka poročila: ARRS_ZV_RPROJ_ZP_2008/257 1 Samo za aplikativne projekte. Nazaj 2 Napišite kratko vsebinsko poročilo, kjer boste predstavili raziskovalno hipotezo in opis raziskovanja. Navedite ključne ugotovitve, znanstvena spoznanja ter rezultate in učinke raziskovalnega projekta. Največ 18.000 znakov vključno s presledki (približno tri strani, velikosti pisave 11). Nazaj 3 Realizacija raziskovalne hipoteze. Največ 3.000 znakov vključno s presledki (približno pol strani, velikosti pisave 11). Nazaj 4 Samo v primeru bistvenih odstopanj in sprememb od predvidenega programa raziskovalnega projekta, kot je bil zapisan v predlogu raziskovalnega projekta. Največ 3.000 znakov vključno s presledki (približno pol strani, velikosti pisave 11). Nazaj 5 Navedite največ pet najpomembnejših znanstvenih rezultatov projektne skupine, ki so nastali v času trajanja projekta v okviru raziskovalnega projekta, ki je predmet poročanja. Za vsak rezultat navedite naslov v slovenskem in angleškem jeziku (največ 150 znakov vključno s presledki), rezultat opišite (največ 600 znakov vključno s presledki) v slovenskem in angleškem jeziku, navedite, kje je objavljen (največ 500 znakov vključno s presledki), izberite ustrezno šifro tipa objave po Tipologiji dokumentov/del za vodenje bibliografij v sistemu COBISS ter napišite ustrezno COBISS.SI-ID številko bibliografske enote. Navedeni rezultati bodo objavljeni na spletni strani http://sicris.izum.si/. PRIMER (v slovenskem jeziku): Naslov: Regulacija delovanja beta-2 integrinskih receptorjev s katepsinom X; Opis: Cisteinske proteaze imajo pomembno vlogo pri nastanku in napredovanju raka. Zadnje študije kažejo njihovo povezanost s procesi celičnega signaliziranja in imunskega odziva. V tem znanstvenem članku smo prvi dokazali… (največ 600 znakov vključno s presledki) Objavljeno v: OBERMAJER, N., PREMZL, A., ZAVAŠNIK-BERGANT, T., TURK, B., KOS, J.. Carboxypeptidase cathepsin X mediates ß2 - integrin dependent adhesion of differentiated U-937 cells. Exp. Cell Res., 2006, 312, 2515-2527, JCR IF (2005): 4.148 Tipopologija: 1.01 - Izvirni znanstveni članek COBISS.SI-ID: 1920113 Nazaj 6 Navedite največ pet najpomembnejših družbeno-ekonomsko relevantnih rezultatov projektne skupine, ki so nastali v času trajanja projekta v okviru raziskovalnega projekta, ki je predmet poročanja. Za vsak rezultat navedite naslov (največ 150 znakov vključno s presledki), rezultat opišite (največ 600 znakov vključno s presledki), izberite ustrezen rezultat, ki je v Šifrantu raziskovalnih rezultatov in učinkov (Glej: http://www.arrs.gov.si/sl/gradivo/sifranti/sif-razisk-rezult.asp), navedite, kje je rezultat objavljen (največ 500 znakov vključno s presledki), izberite ustrezno šifro tipa objave po Tipologiji dokumentov/del za vodenje bibliografij v sistemu COBISS ter napišite ustrezno COBISS.SI-ID številko bibliografske enote. Navedeni rezultati bodo objavljeni na spletni strani http://sicris.izum.si/. Nazaj 7 Pomen raziskovalnih rezultatov za razvoj znanosti in za razvoj Slovenije bo objavljen na spletni strani: http://sicris.izum.si/ za posamezen projekt, ki je predmet poročanja. Nazaj 8 Največ 4.000 znakov vključno s presledki Nazaj 9 Največ 4.000 znakov vključno s presledki Nazaj 10 Rubrike izpolnite/prepišite skladno z obrazcem "Izjava sofinancerja" (http://www.arrs.gov.si/sl/progproj/rproj/gradivo/), ki ga mora izpolniti sofinancer. Podpisan obrazec "Izjava sofinancerja" pridobi in hrani nosilna raziskovalna organizacija – izvajalka projekta. Nazaj Obrazec: ARRS-ZV-RPROJ-ZP/2008 v1.00 Projekt Z4-9697 Stran 18 od 18